[发明专利]基于成体干细胞-再生丝素蛋白组织工程支架的人工肝修复材料的培养方法

摘要

本发明涉及一种基于成体干细胞‑再生丝素蛋白组织工程支架的人工肝修复材料的培养方法，主要分为两步，第一步采用静电纺丝法制备混有HGF、FGF4因子、牛血清蛋白和再生丝素蛋白材料的用于生物人工肝的成体干细胞‑再生丝素蛋白组织工程支架，第二步基于成体干细胞‑再生丝素蛋白组织工程支架培养人工肝修复材料，脂肪间充质干细胞(ADSCs)或骨髓间充质干细胞(BMSCs)在再生丝素蛋白材料上粘附、增殖，在支架缓释的HGF、FGF4因子作用下诱导成肝脏样细胞。本发明制备的基于成体干细胞‑再生丝素蛋白组织工程支架的人工肝修复材料生物相容性好、生物降解性优异、力学性能优异，是一种良好的生物人工肝备选支架材料。

主权项

1.基于成体干细胞‑再生丝素蛋白组织工程支架的人工肝修复材料的培养方法，其特征是包括以下步骤：(a)成体干细胞的原代培养与传代；将成体干细胞原代接种培养，待接种后细胞密度达90％以上，则传代；(b)细胞培养；进行传代后在用于生物人工肝的成体干细胞‑再生丝素蛋白组织工程支架上接种，并恒温培养；培养基为α‑MEM+10～20v/v％FBS或DMEM+10～20v/v％FBS；(c)成肝脏样细胞诱导培养；细胞贴壁后，将培养基更换为加入用于生物人工肝的组织工程支架的基础培养基，每隔3～4天换一次基础培养基；所述基础培养基为含5～10v/v％FBS的DMEM培养基；(d)再生丝素蛋白纤维支架上成体干细胞的体外诱导成肝能力；种植于再生丝素蛋白纤维支架上的成体干细胞经诱导培养7～15天后，成体干细胞即诱导成肝脏样细胞；所述成体干细胞为脂肪间充质干细胞或骨髓间充质干细胞；所述用于生物人工肝的成体干细胞‑再生丝素蛋白组织工程支架的制备方法如下：(1)以蚕茧为原料，经脱胶、溶解、透析和浓缩后，制备质量百分比为30～40％的再生丝素蛋白水溶液；(2)以水为溶剂，配制HGF、FGF4因子和牛血清蛋白水溶液，其中HGF与FGF4因子的质量浓度都为15～25μg/mL，牛血清蛋白的质量浓度为0.6～1mg/mL；(3)将所述再生丝素蛋白水溶液与所述HGF、FGF4因子和牛血清蛋白水溶液以60～130:1的体积比混合，制备含HGF、FGF4因子和牛血清蛋白的再生丝素蛋白溶液；(4)以所述含HGF、FGF4因子和牛血清蛋白的再生丝素蛋白溶液为纺丝液，采用静电纺丝法制备得到用于生物人工肝的成体干细胞‑再生丝素蛋白组织工程支架。