[发明专利]一种促进创伤再生修复的细胞制剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种促进创伤再生修复细胞制剂的制备方法，按照如下步骤进行：将跟腱组织块剪碎并消化后，离心弃上清液，并将得到的肌腱干细胞群加入培养液中重悬后过滤，接种于培养板中培养，之后与富血小板血浆混合后加入生理盐水中配置成肌腱干细胞细胞制剂。通过分离培养大鼠肌腱干细胞，并将体外培养的肌腱干细胞混合富血小板血浆配置成细胞制剂，富血小板血浆中含有大量的生长因子，如PDGF、EGF、TGF‑β1、IGF等，这些因子对肌腱的修复具有很大的促进作用，在体内富血小板血浆促进了肌腱细胞的增殖及I型、III型胶原蛋白的表达，而这些是肌腱的主要组成部分，实验结果为人体肌腱损伤修复起到了一定的指导作用。

主权项

一种促进创伤再生修复细胞制剂的制备方法，其特征在于按照如下步骤进行：步骤(1)、配置肌腱干细胞培养液；步骤(2)、无菌条件下将跟腱组织块洗涤并剪碎；步骤(3)、将所述步骤(2)中剪碎的跟腱组织块加入消化液中，固液比为1:5，37℃消化一段时间，加入2‑5mL所述步骤(1)中配置的肌腱干细胞培养液终止消化；步骤(4)、将所述步骤(3)中得到的跟腱组织悬液离心弃上清液，得到肌腱干细胞群；步骤(5)、取所述步骤(4)中得到的肌腱干细胞群加入所述步骤(1)中配置的肌腱干细胞培养液中重悬后过滤，以1×10⁵个/mL接种于培养板中，置于37℃、5％CO₂培养箱中进行原代培养，原代培养24‑36h后第一次换液，之后每隔2d换液一次；步骤(6)、第三次换液12‑24h后将原代培养的肌腱干细胞以5000‑8000个/cm²接种于培养瓶中进行传代培养；步骤(7)、取所述步骤(6)中第三代肌腱干细胞洗涤后加入2mLⅠ型胶原酶消化10min；步骤(8)、将所述步骤(7)中的肌腱干细胞悬液离心并弃上清液得到肌腱干细胞；步骤(9)、取新鲜血液3‑5mL，加入柠檬酸钠0.1mol/L后离心并收集上清液，即为富血小板血浆；步骤(10)、将所述步骤(8)中制得的肌腱干细胞与所述步骤(9)中提取的富血小板血浆混合后加入生理盐水中。