[发明专利]一种胎盘多能干细胞提取制备方法在审
| 申请号： | 201610570529.6 | 申请日： | 2016-07-19 |
| 公开（公告）号： | CN105969722A | 公开（公告）日： | 2016-09-28 |
| 发明（设计）人： | 张正亮 | 申请（专利权）人： | 安徽惠恩生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 北京和信华成知识产权代理事务所(普通合伙) 11390 | 代理人： | 胡剑辉;韩立峰 |
| 地址： | 230000 安徽省*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开一种胎盘多能干细胞提取方法，包括以下步骤：无菌条件下获取胎盘组织，经PBS反复冲洗、碘伏消毒、生理盐水充分冲洗胎盘，至少三次；将胎盘组织剪成1×1×1mm3碎片，置于无菌离心管中，利用0.25％胰蛋白酶和0.2％Ⅳ型胶原酶消化胎盘组织碎片，离心收集得细胞沉淀，将细胞沉淀重悬于含体积分数为10％的胎牛血清α‑MEM培养基，常规方法冻存；流式细胞学分析：CD73、CD90和CD105细胞表达。本发明在无菌条件下获取胎盘，接着对胎盘进行PBS反复冲洗、胎盘表面消毒、生理盐水冲洗胎盘一系列预处理，保证获取的胎盘新鲜，便于保证胎盘组织中多能干细胞的活性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 胎盘 多能 干细胞 提取 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种胎盘多能干细胞提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)预处理：无菌条件下获取胎盘组织，经PBS反复冲洗，去除胎盘血，使用碘伏消毒脐带及胎盘表面；生理盐水充分冲洗残留脐带和胎盘，至少三次；(2)胎盘多能干细胞分离培养：将胎盘组织剪成1×1×1mm3碎片，将胎盘组织碎片置于无菌离心管中，利用0.25％胰蛋白酶和0.2％Ⅳ型胶原酶消化胎盘组织碎片，去除组织留取消化液，离心收集得细胞沉淀，将细胞沉淀重悬于含体积分数为10％的胎牛血清α‑MEM培养基，在37℃，体积分数为5％的二氧化碳培养箱中培养，培养60h后半量换液，去除未贴壁细胞，每5天换液一次，常规方法冻存；(3)免疫表达：流式细胞学分析：CD73、CD90和CD105细胞表达。
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