[发明专利]一种抗英夫利西抗体ELISA检测试剂盒和检测方法

摘要

本发明公开了一种抗英夫利西抗体ELISA检测试剂盒和检测方法。包括英夫利西抗体包被的ELISA板、HRP标记的抗λ链的IgG抗体、HRP标记的抗F(ab’)₂段的IgG抗体、四甲基联苯胺(TMB)、H₂SO₄和辅助试剂组成；所述的英夫利西抗体包被的ELISA板是通过以下方法制备的：用TNF‑α包被ELISA板，然后加入英夫利西单克隆抗体，使英夫利西单克隆抗体与TNF‑α结合固定于ELISA板上作为固定抗原，由此得到英夫利西抗体包被的ELISA板。本发明操作简便，普通实验室均可开展，测量结果灵敏性高，特异性强，能够广泛应用临床。

主权项

一种抗英夫利西抗体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：首先用TNF‑α包被ELISA板，然后加入英夫利西单克隆抗体，使英夫利西单克隆抗体与TNF‑α结合固定于ELISA板上作为固定抗原，将ELISA板上固定有英夫利西单克隆抗体的孔分成待测样本孔和标准曲线孔；标准曲线孔中加入含BSA的PBS溶液，然后再加入倍比稀释的已知浓度的抗F(ab’)₂段的IgG抗体，而后加入底物TMB，在HRP的催化下变为蓝色，后在酸的作用下变为黄色，最后测定其吸光度值，通过已知浓度的抗F(ab’)₂段的IgG抗体的吸光度值绘制出标准曲线；在待测样本孔处加入待测血清，使血清中的抗英夫利西抗体(ATI)与IFX结合从而固定下来，然后再加入针对ATI的HRP标记的抗λ链的IgG抗体，而后加入底物TMB，在HRP的催化下变为蓝色，后在酸的作用下变为黄色，最后测定其吸光度值，根据待测血清的吸光度值与上述标准曲线计算出血清中ATI的浓度。