[发明专利]自动化微生物分子检测方法及其应用

摘要

本发明属于微生物的测定或检验方法技术领域，特别涉及一种自动化微生物分子检测方法及其应用。该检测方法，包括试样预处理步骤、核酸提纯步骤、靶标基因定量检测步骤，上述步骤均在多孔板内通过人机互交的形式由机械臂自动完成；试样预处理步骤将核酸裂解液移进行抽滤得到核酸初提液的步骤；靶标基因定量检测步骤之前还包括富集步骤。本方法将现有技术中由手工完成的试样预处理步骤整合进整体自动化流程，有利于实现微生物分子检测全过程的自动化控制，适合在土壤检测、植物检测、食品检测中应用。

主权项

1.一种自动化微生物分子检测方法，其特征在于：包括试样预处理步骤、核酸提纯步骤、靶标基因定量检测步骤，上述步骤均通过人机互交的形式由机械臂自动完成；试样预处理步骤包括：(1)在待测试样中添加细胞裂解液；(2)根据需要进行加热和/或振荡处理得到核酸裂解液；(3)将核酸裂解液移进行抽滤得到核酸初提液；所述抽滤步骤为：(1)取一块多孔板；(2)在多孔板外罩上围护结构；(3)在围护结构顶部盖上过滤多孔板使围护结构组成密闭空间，过滤多孔板的反应孔内设置有滤膜和连通反应孔内外空间的通道；(4)将围护结构组成密闭空间抽真空使其形成负压，过滤多孔板内的核酸裂解液透过滤膜滴入位于其下方的多孔板；核酸提纯步骤包括：(1)在核酸初提液中加入高盐溶液和可与核酸特异结合的磁性粒子，振摇后施加磁场吸附磁性粒子，移除全部液体；(2)加入盐洗液，振摇洗脱去除磁性粒子结合的盐粒子，施加磁场吸附磁性粒子，移除全部液体；(3)加入乙醇，振摇洗脱去除磁性粒子结合的其它杂质，施加磁场吸附磁性粒子，移除全部液体，并室温干燥；(4)加入核酸洗脱液，振摇洗脱吸附在磁性粒子上的核酸，施加磁场吸附磁性粒子，移取全部液体得到高纯核酸；靶标基因定量检测步骤包括：(1)在高纯核酸中加入靶标基因PCR扩增上下游引物、PCR扩增缓冲液、检测探针，依次进行解链、退火、延伸进行靶基因的PCR扩增；(2)于每延伸结束时进行荧光检测，通过荧光值计算靶标基因拷贝数，继而计算出待分析试样中靶标微生物的克隆数。