[发明专利]用于表达EGFR的单细胞分选和多基因位点检测的微流控芯片

摘要

本发明提供一种用于表达EGFR的单细胞分选和多基因位点检测的微流控芯片，所述微流控芯片包括依次叠放在一起并相互密封的四层结构，由上至下分别为顶盖、微流体通道层、带有微孔阵列的基板以及带有腔体组的底板。本发明还提供一种与所述芯片配套的用于EGFR基因多个突变位点单细胞水平检测的系统。本发明的微流控芯片及其相应的检测系统可以快速、简便和廉价的从大量细胞中分选出目的细胞，并对其中的单个细胞进行EGFR多基因位点分析。

主权项

用于表达EGFR的单细胞分选和多基因位点检测的微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片包括依次叠放在一起并相互密封的四层结构，由上至下分别为顶盖、微流体通道层、带有微柱和微孔阵列的基板以及带有腔体组的底板；所述顶盖上设有一个样品入口、一个样品出口以及一个废液口；所述样品入口与微流体通道层的U形主流道上的样品进入口连通，所述样品出口与微流体通道层的U形主流道上的样品流出口连通，所述废液出口与微流体通道层的分支流道上的废液口连通；所述微流体通道层上设有一条U形主流道，U形主流道的一端设有样品进入口，另一端设有样品流出口；带有样品进入口一侧的主流道的前段较宽，设有过滤区，用于过滤样品，除去较大杂质；主流道的中段是分选区，用于分离肿瘤细胞；带有样品流出口一侧的主流道的后段较窄，设有捕获区，用于限定液体流动进行单细胞捕获；主流道上还设有一条与分选区垂直设置的分支流道，分支流道的另一端设有废液口，其与顶盖上的废液出口连通，用于废液的流出；所述主流道的过滤区，分选区以及捕获区分别位于基板上的过滤区、分选区和捕获区上方；所述带有微柱和微孔阵列的基板上设有过滤区、分选区和捕获区；过滤区由间距渐变的排状分布的微柱阵列组成；分选区由大小和间距统一的微柱阵列组成；捕获区带有微孔阵列，所有的微柱和微孔设置在相应的微流体通道层下方，微孔的内部设有电极，阴极和阳极成对设置在微孔侧壁上；每个微孔具有与下层底板相连通的通道；所述带有腔体组的底板上设有多个腔体，每个腔体由收集腔和扩增腔组成，收集腔通过连通孔与基板捕获区对应的微孔相连，用于分开收集不同微孔中的细胞裂解液；收集腔和扩增腔之间用微阀连接；扩增腔内预置有多重置换扩增试剂和/或PCR扩增试剂，用于扩增细胞裂解液中的DNA以及检测EGFR基因上的多个突变位点。