[发明专利]肠道分节丝状菌鞭毛蛋白的检测方法

摘要

本发明公开了一套检测小鼠肠道分节丝状菌SFB鞭毛蛋白的方法与应用，包括PCR方法、蛋白质变性电泳与免疫印迹方法(SDS‑PAGE‑Western blotting)、细菌原位杂交结合免疫组化方法(FISH+IHC)。所述PCR方法为，设计合成了一对能特异性扩增SFB鞭毛蛋白Flic3基因的引物，使用该引物对样品DNA进行PCR扩增后，可以在凝胶电泳后检测到与Flic3基因片段大小一致的DNA条带。所述蛋白质变性电泳与免疫印迹方法为，成功制备了兔抗SFB Flic3鞭毛蛋白的多克隆抗体，并可以使用该蛋白对样品中是否存在SFB Flic3鞭毛蛋白进行检测。所述细菌原位杂交结合免疫组化方法为使用SFB16S rRNA基因特异常性探针和兔抗SFB Flic3鞭毛蛋白多克隆抗体检测SFB鞭毛蛋白的表达情况、SFB细菌的形态及SFB与肠上皮的相互作用情况。本发明所涉及的检测方法具有快速、直观和表象的优点。

主权项

1.一种肠道分节丝状菌鞭毛蛋白的检测方法，其特征在于所述方法为：提取小鼠待测肠道内容物DNA为模板，以SFB FliC3‑F和SFB FliC3‑R为引物进行PCR扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，扩增产物长度与mflic3基因长度相同，则待测肠道含有肠道分节丝状菌鞭毛蛋白；所述mflic3基因核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示；SFB FliC3‑F:5′‑ATG ATA ATT AAY CAC AAT ATG AAT G‑3′，SFB FliC3‑R:5′‑TCT YAA KAT WGA AAG WAC TTG TTG T‑3′。