[发明专利]用于MALDITOF细菌及酵母类真菌鉴定的菌体预处理方法在审
申请号: | 201610579369.1 | 申请日: | 2016-07-21 |
公开(公告)号: | CN106226530A | 公开(公告)日: | 2016-12-14 |
发明(设计)人: | 曹洁茹;蔡克亚;温庆仕;崔爽爽;封松利;刘美丽;赵高岭;王则宇;付光宇;吴学炜 | 申请(专利权)人: | 郑州安图生物工程股份有限公司 |
主分类号: | G01N33/68 | 分类号: | G01N33/68 |
代理公司: | 郑州异开专利事务所(普通合伙)41114 | 代理人: | 王霞 |
地址: | 450016 河南省*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | 本发明公开了一种用于MALDI TOF细菌及酵母类真菌鉴定的菌体预处理方法:首先将样本分离纯化,微生物纯菌落用培养基培养;挑取菌体,用超纯水悬浮、混匀;加入无水乙醇混匀,使其体积分数为70~80%,静置、离心,去上清;将沉淀的菌体恒温温育,然后加入50%的甲酸溶液,充分混合后,加乙腈溶液,甲酸与乙腈的体积比为1:1~1:3,菌体质量与混合液总体积比为0.5~1mg:10ul;混匀后静置;将混合溶液离心,吸取上清液点于样品点上,风干后加入基质溶液覆盖,干燥后即可进行菌体鉴定。本发明有效的缩短了提取时间,实现对菌体进行快速高效的提取,大大增加了图谱特征峰数量及图谱峰质量,提高了鉴定准确率。 | ||
搜索关键词: | 用于 malditof 细菌 酵母 真菌 鉴定 菌体 预处理 方法 | ||
【主权项】:
一种用于MALDI TOF细菌及酵母类真菌鉴定的菌体预处理方法,其特征在于:包括以下步骤:第一步,将样本进行分离纯化,得到的微生物纯菌落采用合适的培养基进行培养;第二步,从培养基中挑取适量的菌体,使用超纯水悬浮、混匀;第三步,加入无水乙醇,充分混匀,使混合液中无水乙醇的体积分数达到70~80%,静置1~5分钟;第四步,将第三步静置后的混合溶液10000~15000rpm/min转速离心3~5分钟,倒去上清;第五步,将沉淀的菌体在40℃±1℃条件下恒温温育5~25分钟,然后加入体积分数50%的甲酸溶液,充分混合后,再加入乙腈溶液,其中甲酸溶液与乙腈溶液的体积比为1:1~1:3,菌体的质量与混合液的总体积比为0.5~1mg:10ul;混匀后静置1~5分钟;第六步,将第五步的混合溶液8000~15000rpm/min转速离心2~3分钟,吸取上清液备用;第七步,将吸取的上清液点于样品点上,风干后加入基质溶液覆盖,干燥后即可进行菌体鉴定。
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