[发明专利]一种毛发角蛋白复合细胞组织工程化敷料的制备方法

摘要

本发明涉及一种毛发角蛋白复合细胞组织工程化敷料的制备方法，所述制备方法包括毛发角蛋白的制备、细胞悬液的制备以及敷料的制备。本发明的工程敷料是一种效果极佳的创面覆盖物，其有效阻止细菌感染，加速创面愈合，具有良好的生物相容性，控制和吸收创面渗液，透气性强，适合气体和水蒸气透过，保护新生组织，无毒副作用等优势；更重要的是，该工程敷料能自行溶解被机体吸收，免除了解除时流血多及病人的痛苦，也不会留下碎屑而延缓伤口的愈合，为促进皮肤的再生提供一个有利于创面愈合的环境。

主权项

一种毛发角蛋白复合细胞组织工程化敷料的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括毛发角蛋白的制备、细胞悬液的制备以及敷料的制备，具体方法如下：(1)毛发角蛋白的制备，该毛发角蛋白为毛发角蛋白颗粒或毛发角蛋白凝胶：①毛发角蛋白颗粒的制备S1：脱脂与软化：称取毛发进行脱脂和软化；S2：脱色：将软化后的毛发放置于脱色溶液中进行脱色，所述脱色溶液的成分为焦磷酸钠3～5重量份、过硫酸钾1～2重量份、双氧水70～90体积份、浓氨水22～33体积份以及水350～450体积份；S3：清洗、烘干：将脱色后的毛发进行清洗，并且干燥；S4：粉末制备：在干燥后的毛发剪碎，并加入液氮冷冻研磨，得到长度为0.1～2mm的毛发粗粉；将粗粉放在球磨罐中，放入玛瑙珠，加入生理盐水，旋转，球磨，直至粒径50μm～90μm为止，则为毛发角蛋白颗粒匀浆；S5：离心：在匀浆中加入生理盐水进行离心，弃去上清液，并去除沉淀的表层和底层，取中段颗粒大小均匀的毛发角蛋白，加生理盐水混匀继续离心，重复上述操作2～4次，最后仍然取中段颗粒大小均匀的毛发角蛋白，则得到为高纯度的毛发角蛋白泥；S6：灭菌：包装，密封，采用钴60辐照法灭菌，保存，待用；②毛发角蛋白凝胶的制备将步骤S6中灭菌后的毛发角蛋白泥加入水，充分混匀，放置于温箱中孵育2‑3小时，至呈现较为均一的颜色和性状为止；灭菌，得到毛发角蛋白凝胶；(2)细胞悬液的制备A.骨髓间充质细胞的分离以及细胞原代培养：收取骨髓血离心，吸取单核细胞层，离心，弃去上清，在培养液中重悬细胞，接种，在培养箱内进行原代培养；B.传代细胞的扩增培养：移去培养液，胰酶消化，骨髓干细胞呈圆形时终止消化；制成单细胞悬液，以1:2传代，待梭形细胞逐渐长成单层并达到70～90％融合时，胰酶消化，按1:2或1:4进行传代培养，得到骨髓间充质细胞的细胞悬液；(3)敷料的制备：将步骤(1)中制备的毛发角蛋白与步骤(2)中得到的细胞悬液混合均匀，得到工程辅料。