[发明专利]一种扩增柯萨奇病毒A16型的优化工艺方法有效
| 申请号： | 201610581199.0 | 申请日： | 2016-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN106222146A | 公开（公告）日： | 2016-12-14 |
| 发明（设计）人： | 李兰娟;陈科达;张严峻;吴晓鑫 | 申请（专利权）人： | 浙江大学医学院附属第一医院 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00 |
| 代理公司： | 杭州奥创知识产权代理有限公司33272 | 代理人： | 杨嘉芳 |
| 地址： | 310006 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种扩增柯萨奇病毒A16型的优化工艺方法，该方法以片状纤维为载体，用生物反应器中扩增非洲绿猴肾细胞，在细胞培养阶段用含8v/v％的血清的DMEM培养基，培养细胞第5‑6天换液成无血清DMEM培养基，在病毒接种吸附后使用带3‑5％的血清DMEM培养基，在收获病毒阶段采用无血清培养基添加0.5w/v％的水解乳蛋白，静止再吸附3小时继续培养，同时每24小时左右补充2.0g/L的葡萄糖。该方法具有良好重复性和稳定性，能达到较高的病毒滴度，可减轻后期纯化难度并适应生物制品的要求，具有良好的应用价值，可适用于以片状纤维载体的生物反应器扩增柯萨奇病毒A16型。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 扩增 柯萨奇 病毒 a16 优化 工艺 方法 | ||
【主权项】：
一种扩增柯萨奇病毒A16型的优化工艺方法，其特征在于，以片状纤维为载体，用生物反应器扩增非洲绿猴肾细胞，在细胞培养阶段用含8v/v％的血清的DMEM培养基，培养细胞第5‑6天换液成无血清DMEM培养基，吸附柯萨奇病毒A16型病毒2‑3小时，加入3‑5v/v％胎牛血清，继续培养20小时，弃去全部培养液，并用磷酸缓冲液PBS冲洗去除血清，全部换成无血清DMEM培养基加0.5w/v％水解乳蛋白，静止再吸附3小时利于更多细胞均匀感染病毒，继续培养，同时每24小时左右添加2.0g/L的葡萄糖,采用换液收获的方式，使优化工艺达到较高的病毒滴度。
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