[发明专利]一种杨树腐烂病菌原生质体制备方法以及制备的原生质体的转化方法

摘要

本发明提供了一种杨树腐烂病病原菌原生质体的制备及其遗传转化的方法，属于分子植物病理学领域。原生质体的制备方法包括将杨树腐烂病菌接种到YEPD液体培养基中进行菌丝培养，然后将杨树腐烂病菌菌丝进行酶解处理，即得。且利用PEG介导的方法对制备的原生质体进行遗传转化，获得突变体。本发明方法制备原生质体效率高，酶解后的原生质体可高达10⁸‑10⁹个/mL，其转化效率高，原生质体的活性高，而且本方法成本低，操作简单，提高转化效率，大大缩短研究时间。该方法的建立不但为今后杨树腐烂病菌的分子生物学研究奠定了一个良好的基础，而且对杨树腐烂病菌的防治、组织病理学的研究也均存在潜在的利用价值。

主权项

一种杨树腐烂病菌原生质体的制备方法，其特征是，包括如下步骤：1)菌丝培养与收集将杨树腐烂病菌接种到YEPD液体培养基中进行菌丝培养，然后进行固液分离，获得杨树腐烂病菌菌丝；2)酶解处理向原生质体酶解液中加入杨树腐烂病菌菌丝，进行酶解处理，溶解菌丝细胞的细胞壁，然后进行固液分离，即得杨树腐烂病菌原生质体。