[发明专利]一种用于农杆菌介导大豆子叶节转化的外植体选择方法及应用

摘要

本发明公开了一种用于农杆菌介导大豆子叶节转化的外植体选择方法及应用。本发明提供了一种制备用于大豆子叶节转化的外植体的方法，包括如下步骤：1)种植大豆种子，选取处于如下6种萌发形态的种子：Y状态、YL状态、HG状态、HG+CG状态、CG状态、G状态；2)将处于6种萌发形态的种子分别进行GUS基因瞬时转染和染色，统计所述源于6种萌发形态种子的转染后染色率；选取其中染色率显著高的对应的处于某萌发形态的种子作为候选种子；3)截取所述候选种子的子叶节，得到用于大豆子叶节转化的外植体。本发明的实验证明，现有的方法对大豆子叶节外植体仅从某一萌发时间开始，会造成外植体选取的不全面。本发明的方法选取的外植体全面，有助于提高大豆遗传转化的效率。

主权项

1.一种制备大豆目标子叶节外植体的方法，包括如下步骤：1）检测待测大豆种子在6个萌发状态下子叶节外植体的瞬时转化率和丛生芽率，选择满足如下A和B，作为外植体制备候选萌发时期；A为6个萌发状态下子叶节外植体的瞬时转化率中显著高的某个萌发状态或某几个萌发状态；B为6个萌发状态下子叶节外植体的丛生芽率中显著高的某个萌发状态或某几个萌发状态；2）检测待测大豆种子在所述外植体制备候选萌发时期下子叶节外植体的稳定转化率，选择所有候选萌发时期子叶节外植体的转化率显著高的某个候选萌发时期或某几个候选萌发时期，作为外植体制备时期；3）对所述外植体制备时期的待测大豆种子截取子叶节，得到待测大豆目标子叶节外植体；所述6个萌发状态为如下（1）‑（6）：（1）Y状态：子叶呈白色,下胚轴包裹在种皮中；（2）YL状态：子叶呈白色，下胚轴突破种皮且呈白色；（3）HG状态：子叶呈白色，下胚轴突破种皮且呈黄绿色；（4）HG+CG状态：子叶近下胚轴处呈黄绿色其余部分呈白色，下胚轴突破种皮且呈绿色；（5）CG状态：子叶全部呈黄绿色，下胚轴突破种皮且呈绿色；（6）G状态：子叶叶边缘呈墨绿色，下胚轴突破种皮且呈绿色。