[发明专利]一种适用于规模化生产重组人源胶原蛋白的毕赤酵母发酵培养基

摘要

本发明公开了一种适用于规模化生产重组人源胶原蛋白的毕赤酵母发酵培养基。本发明的培养基中添加了0.01～10g/L代谢调节剂，能够调节毕赤酵母的新陈代谢，加快重组蛋白的表达，缩短发酵周期，降低能耗，减少出错风险，保证稳定的工业化生产。使用本发明的培养基，在1000L发酵罐上规模化生产重组人源胶原蛋白，甲醇诱导周期缩短了20％，重组人源胶原蛋白的表达量提高了16.5％。本发明的毕赤酵母发酵培养基特别适用于工业化高密度发酵表达重组人源胶原蛋白的毕赤酵母甲醇诱导阶段，能够有效降低生产成本，产生显著的经济效益，对于重组人源胶原蛋白的工业化生产具有十分重要的实际意义。

主权项

1.一种适用于规模化生产重组人源胶原蛋白的毕赤酵母发酵方法，其包括：/n将菌种液按10％接种量加到含有500L发酵培养基的1000L发酵罐中，调节搅拌转 速200-600rpm、罐压0.2-1.0bar、调节空气流量使溶氧＞30％；当碳源耗尽后， 溶氧陡然上升，开始流加50％甘油，补充碳源，至菌体湿重为216g/L，停止补加50％ 甘油；甘油耗尽后开始流加甲醇，作为新的碳源，进入甲醇诱导培养阶段，通过调节转 速、罐压、空气流量和流加甲醇速度使溶氧＞20％，每8小时进行取样，测定菌 体湿重和重组人源胶原蛋白表达量，诱导发酵96h后，结束发酵，收集发酵液，离心获 得发酵液上清，经HPLC检测，最终重组人源胶原蛋白浓度为18.4g/L，/n其中，所述发酵培养基：85％H₃PO₄ 26.7mL/L；CaSO₄·2H₂O 1.175g/L；K₂SO₄ 18.2g/L；MgSO₄·7H₂O 14.9g/L；KOH 4.13g/L；甘油40.0g/L；PTM1 4.35mL/L；丙酮酸钠 0.5g/L；/n所述毕赤酵母为巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris，保藏编号为CGMCC No.5021。/n