[发明专利]一种提高重组人源胶原蛋白生产水平的发酵工艺

摘要

本发明公开了一种提高重组人源胶原蛋白生产水平的发酵工艺，首先将毕赤酵母菌种液接种到灭菌的发酵培养基中，发酵培养14～18小时后，开始补加甲醇进行诱导表达，同时向发酵培养基中加入丙酮酸钠，其中丙酮酸钠的加入量为0.01～10g/L。本发明在发酵过程中，选取在甲醇诱导表达阶段加入丙酮酸钠，提高了重组人源胶原蛋白的生物合成速率，并且采用连续流加的方式，能够进一步提高重组人源胶原蛋白的生物合成速率，发酵时间缩短，同时重组人源胶原蛋白的表达量增加，发酵水平提高了20％以上，节约了生产成本，特别适用于重组人源胶原蛋白的工业化大规模生产，能够为产业化生产带来巨大的实际应用价值。

主权项

1.一种提高重组人源胶原蛋白生产水平的发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：将毕赤酵母种子液按照10%的接种量加到含有500L毕赤酵母发酵培养基的1000L发酵罐中，初始搅拌转速200rpm、罐压0.05MPa，调节空气流量和转速使溶氧＞30%，当碳源耗尽后，溶氧陡然上升，开始流加50%甘油，补充碳源，至菌体湿重为213g/L，停止补加甘油，此时发酵培养时间为18小时，甘油耗尽后开始流加甲醇，进入甲醇诱导培养阶段，同时连续流加丙酮酸钠溶液至发酵结束，总加入量为0.1g/L，调节转速、空气流量和流加甲醇速度使溶氧＞20%，诱导发酵90h，其中，所述的毕赤酵母为巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris，保藏编号为CGMCC No.5021，所述的毕赤酵母发酵培养基的配方为85％H₃PO₄ 26.7mL/L，CaSO₄·2H₂O 1.175g/L，K₂SO₄ 18.2g/L，MgSO₄·7H₂O 14.9g/L，KOH 4.13g/L，甘油40.0g/L，PTM1溶液4.35mL/L。