[发明专利]一种利用DNA分子标记快速区分柱型苹果苗木的方法有效
| 申请号： | 201610591825.4 | 申请日： | 2016-07-26 |
| 公开（公告）号： | CN106191276B | 公开（公告）日： | 2020-01-07 |
| 发明（设计）人： | 张玉刚;孙欣;柏素花;孙晓红;侯鸿敏;刘源霞;祝军;戴洪义 | 申请（专利权）人： | 青岛农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 37104 青岛高晓专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 张世功 |
| 地址： | 266109 山东省青*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用DNA分子标记快速区分柱型苹果苗木的方法。以待检测的苹果叶片DNA为模版，以两对寡聚脱氧核糖核苷酸序列Co1和Co2作为引物对，同时对与柱型基因相连锁的DNA分子标记进行PCR反应扩增，对扩增产物进行电泳检测，2对引物的扩增产物电泳结果中至少1对引物有所述DNA分子标记对应的DNA特异条带，则说明对应的苹果苗木为柱型苹果；2对引物的扩增产物电泳结果均无对应的DNA特异条带，则为普通型苹果。利用本发明方法可方便、快速、准确区分出1‑2年生苹果苗木中的柱型类型，大大提高育种效率，加速育种进程；同时，还能简单、快捷地鉴别出真假柱型苹果品种苗木，避免了假苗木带来的纠纷。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 dna 分子 标记 快速 区分 苹果 苗木 方法 | ||
【主权项】：
1.一种利用DNA分子标记快速区分柱型苹果苗木的方法，其特征在于按照如下步骤操作：/n第一步，采用CTAB法提取苹果基因组DNA：取2ml离心管，加入1.2ml十六烷基三甲基溴化铵CTAB和50μLβ-巯基乙醇，并于65℃水浴锅中预热，取0.5g左右幼嫩的苹果叶片，加入液氮快速研磨成细粉，转入上述装有CTAB的离心管中，震荡混匀，置于65℃水浴锅中水浴30min，期间颠倒混匀；取出冷却至室温，加入氯仿，轻轻颠倒混匀，静止，4℃，12000rpm离心，取1000μL上清液至新的2ml离心管中；加入上清液1/2体积的三羟甲基氨基甲烷饱和酚，颠倒混匀，静止，再加入上清液1/2体积的氯仿，颠倒混匀，静止，4℃，12000rpm离心，取800μL上清液至新的2ml离心管中；加入氯仿，颠倒混匀，静止，4℃，12000rpm离心，取600μL上清液至新的1.5ml离心管中；加入上清液1/10的无水乙醇和1/20的醋酸钠，-20℃静止30min，4℃，12000rpm离心，将上清移到新的1.5ml的离心管中；加入等体积的异丙醇，-20℃静止2小时，4℃，12000rpm离心，弃上清，保留沉淀；加入1ml 75％的无水乙醇清洗沉淀一次，然后利用无水乙醇清洗一次，待酒精挥发干后，加入50μL无菌的双蒸水ddH
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