[发明专利]一种简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒及其使用方法有效
申请号: | 201610592411.3 | 申请日: | 2016-07-25 |
公开(公告)号: | CN106093436B | 公开(公告)日: | 2018-12-11 |
发明(设计)人: | 高飞;钱智鹏;乔继彪;张映菲;张余琴 | 申请(专利权)人: | 高飞 |
主分类号: | G01N33/68 | 分类号: | G01N33/68 |
代理公司: | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人: | 邱奕才;郑永泉 |
地址: | 510660 广东省广州市天*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明公开了一种简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒及其使用方法,包括标记有生物素的UTP、ATP、CTP、GTP混合物、T7RNA聚合酶、细胞裂解液、链霉亲和磁珠、洗液和蛋白洗脱液。本发明用RNA去抓与之相互作用的蛋白质,首先把已知序列的RNA做好标记(例如biotin),依靠这个标记将RNA固定到某Beads上,再和含有蛋白的物质共孵育,之后去掉未与RNA作用的上清收集从Beads上洗下来的蛋白,得到的蛋白可做质谱或免疫印迹实验。 | ||
搜索关键词: | 一种 简便 检测 rna 蛋白 试剂盒 及其 使用方法 | ||
【主权项】:
1.一种简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒,其特征在于,包括标记有生物素的UTP、ATP、CTP、GTP混合物、T7RNA聚合酶、细胞裂解液、链霉亲和磁珠、洗液和蛋白洗脱液;所述洗液的配方包括如下原料:Tris‑HCL 45~55mmoL/L;EDTA 0.8~1.2mM;KCl 80~120mM;0.1~0.2体积%TritonX‑100;0.05~0.15体积%丙三醇;4.5~5.5体积%DTT;所述Tris‑HCL的pH值为6.8~7.2;所述蛋白洗脱液的配方包括如下原料:220~280mM Tris‑HCl;8.5~11.5体积%(W/V)SDS;0.4~0.6体积%(W/V)溴酚蓝;45~55%(V/V)甘油;4~6%(W/V)β‑巯基乙醇;所述Tris‑HCL的pH值为6.6~7.0;所述细胞裂解液的配方包括如下原料:0.05~1.5体积%NP‑40;0.15~0.35体积%去氧胆酸钠;Tris‑HCL 45~55mmoL/L;Nacl 140~160mmoL/L;EDTA 0.8~1.2mmoL/L;PMSF 0.8~1.2mmoL/L;所述Tris‑HCL的pH值为7.2~7.5。
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