[发明专利]一种通用型慢病毒载体及其制备方法有效
| 申请号： | 201610594668.2 | 申请日： | 2016-07-26 |
| 公开（公告）号： | CN106011174B | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 刘春香;张怡;芦慧颖;石佳宁;刘艳青 | 申请（专利权）人： | 天晴干细胞股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/66 |
| 代理公司： | 23109 哈尔滨市松花江专利商标事务所 | 代理人： | 侯静 |
| 地址： | 150000 黑龙江省哈尔滨市哈尔*** | 国省代码： | 黑龙;23 |
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| 摘要： | 一种通用型慢病毒载体及其制备方法，涉及一种慢病毒载体及其其制备方法。本发明是要解决目前CAR‑T制备中过程中载体构建步骤烦琐、耗时过长，慢病毒载体无法通用，成本高的问题。该慢病毒载体以pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑Puro质粒为骨架，向质粒骨架的多克隆位点MCS处插入以下元件：CD8α Leader DNA序列、CD8α铰链区、CD28跨膜区‑胞内区、CD137胞内区和CD3ζ。方法：一、引物设计；二、外周血单个核细胞的获得、激活；三、mRNA的提取及RT反应；四、重组质粒制备；五、合成单链CD8α Leader DNA序列；六、将线性载体、目的基因片段及CD8α Leader片段连接，即得到通用型慢病毒载体。本发明用于制备慢病毒载体。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 通用型 病毒 载体 及其 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种通用型慢病毒载体的制备方法，其特征在于该方法/n具体步骤如下：/n一、引物设计：/n设计CD8α铰链区、CD28跨膜区-胞内区、CD137胞内区及CD3ζ的上游引物和下游引物，分别命名为：CD8αF/CD8αR、CD28F/CD28R、CD137F/CD137R、CD3ζF/CD3ζR；/n二、外周血单个核细胞的获得、激活：/n采集成人外周血，提取外周血单个核细胞，将外周血单个核细胞用含10％FBS和1000IU/ml IL-2的RPMI1640培养基重悬并稀释至1×10
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