[发明专利]一种利用高温酯酶去除废纸浆中胶黏物的方法

摘要

本发明公开了一种利用高温酯酶去除废纸浆中胶黏物的方法，所述的酯酶为来源于宏基因组文库的酯酶EstE1,PDB ID:2C7B。具体包括如下步骤：向废纸浆中加入0.1U～1.0U/g(相对于绝干浆质量)的酯酶，处理时间45～120min，温度40～80℃，pH为5.0～9.0，搅拌速度100～150rpm。最后根据TAPPIT‑277标准法检测废纸浆中胶黏物含量。结果证实胶黏物去除率达到54.1％～66.5％，即使在高温环境下仍具有较好的去除效果。本发明利用高温酯酶EST1对废纸浆中的胶黏物进行高效降解，操作过程简便且无需额外机械设备，胶黏物去除效果明显，生产成本低、无污染。

主权项

1.一种利用高温酯酶去除废纸浆中胶黏物的方法，其特征在于包括如下步骤：酯酶EST1的制备过程：利用全基因合成方法获取的EST1酯酶的编码基因，并克隆到表达载体pET23a‑CBD载体上获得重组表达载体，利用CaCl₂转化法，将含有EST1酯酶编码基因的表达质粒转入BL21(DE3)菌种中，获得基因工程菌，将酯酶EST1的菌种接到含Amp100ug/ml的LB种子培养基中扩大培养，当OD值达到0.6～0.8时，将菌液按照1:100的比例接种到含Amp100ug/ml的LB发酵培养基中，摇至OD值为0.6～0.8时加入20mmol/L的IPTG诱导剂进行诱导表达，18～24h后收菌，将菌液在12000r/min条件下离心10min后收集管壁细胞进行超声破碎，之后再以12000r/min条件离心10min后取上清液，即得到粗酶液，1L菌液对应1g纤维素，常温下将粗酶液与纤维素结合30min，适时搅拌，结合后高速离心10min，弃去上清液，将吸附蛋白用PBS缓冲液洗两次，3C蛋白酶在使用前先离心、弃去上清，利用PBS缓冲液清洗2次，向吸附蛋白中加入适量PBS，按1L菌液对应1ml 3C蛋白酶的比例混匀后酶切4h或过夜，酶切后高速离心，上清液即为纯酶；称取100g OCC绝干浆，稀释浆浓至6％，酯酶EST1添加量为1.0U/g(相对于绝干浆质量)，处理温度为80℃，pH为7.0，处理时间120min，搅拌转速为150rpm。