[发明专利]一种基于流式细胞术的高通量筛选高产泰乐菌素菌株的方法

摘要

本发明公开了一种基于流式细胞术的高通量筛选高产泰乐菌素菌株的方法，属于高通量筛选技术领域。本发明通过对诱变之后不同活性的孢子进行PI染色法，通过调节优化FSC，SSC，电压阈值等各个参数正确区分有活性的孢子区域，排除由于孢子本身体积过小带来在流式细胞仪检测中与背景混杂的干扰。对分选后的活孢子采用固液结合的高通量培养方案，有效提高了弗氏链霉菌孔板生长率。本发明的基于流式细胞仪分选有活性的弗氏链霉菌，为弗氏链霉菌的高通量筛选提供一种新型有效的方式。

主权项

一种基于流式细胞术的高通量筛选泰乐菌素高产菌株的方法，其特征在于，主要包括步骤如下：(1)获得弗氏链霉菌的多个含量死孢子在内的待筛选的孢子；(2)利用PI染料对步骤(1)的待筛选的孢子进行染色；(3)使用流式细胞仪检测孢子活性；(4)利用流式细胞仪分选有活性孢子，直接将单个有活性的孢子分选到装有固体培养基的高通量孔板中；(5)待高通量孔板的固体培养基上培养4～5天，直接添加液体种子培养基继续培养得到种子液；将培养好的种子液转接入含有发酵培养基的新的高通量孔板中，发酵培养；(6)配置一定浓度梯度的泰乐菌素标准品，用酶标仪检测，得到泰乐菌素与290nm下的吸光值OD的关系；发酵培养结束后，取发酵液上清，在合适的浓度下用酶标仪测定290nm下的吸光值OD，进而得知待筛选菌株产泰乐菌素含量的相对高低；(7)选取上一步得到的泰乐菌素含量相对较高的菌株多株，进行复筛。