[发明专利]一种棉花愈伤快速诱导增殖的处理方法

摘要

本发明公开了一种棉花愈伤快速诱导增殖的处理方法，包括步骤如下：利用双氧水消毒处理棉花种子半小时，在超净台用灭菌水洗净双氧水后，用灭菌水浸泡种子，露白后种入MS培养基中，常规培养生长7天，取所得无菌幼苗的下胚轴，切段约1厘米，农杆菌侵染后用无菌滤纸吸干残留菌液，转移放入共培养基上进行培养，黑暗条件下共培养48小时后，将所得的棉花下胚轴放入含有抗性筛选的愈伤诱导培养基中，置于单色红光下，16小时红光光照，8小时黑暗，间隔进行愈伤诱导1‑2个月；待愈伤生长约黄豆颗粒大小时，将获得的愈伤取下转入新鲜诱导培养基，直至形成胚型愈伤.本发明可有效加快棉花愈伤生长，同时降低了愈伤硬化和变绿。

主权项

1.一种棉花愈伤快速诱导增殖的处理方法，其特征在于，包括步骤如下：S1、利用质量百分比为15％双氧水消毒处理棉花种子半小时，倒去双氧水，在超净台用灭菌水清洗2‑3次洗净双氧水后，室温条件下，用灭菌水浸泡种子24小时，露白后种入MS培养基中，常规培养生长7天，得无菌幼苗；S2、取所得无菌幼苗的下胚轴，切段1厘米，农杆菌侵染5‑10分钟后，倒掉农杆菌菌液，用无菌滤纸吸干残留菌液，转移放入共培养基上进行培养，该培养基为常规培养基，具体配方为MS4g/L、KNO₃1g/L、葡萄糖25g/L、琼脂6g/L、2，4‑D100ul/L、KT100ul/L，黑暗条件下共培养48小时；S3、共培养结束后，将所得的棉花下胚轴放入含有抗性筛选的愈伤诱导培养基中，具体配方为MS4g/L、KNO₃1g/L、葡萄糖25g/L、琼脂6g/L、2，4‑D100ul/L、KT100ul/L、头孢0.5g/L，置于波长为660nm，光照强度为200‑400勒克斯的单色红光下，16小时红光光照，8小时黑暗，间隔进行愈伤诱导1‑2个月，期间根据需要换新鲜愈伤诱导培养基；S4、待愈伤生长黄豆颗粒大小时，将获得的愈伤取下转入新鲜诱导培养基，具体配方为MS4g/L、KNO₃1g/L、葡萄糖25g/L、琼脂6g/L、2，4‑D100ul/L、KT100ul/L、头孢0.5g/L，直至形成胚性愈伤。