[发明专利]一种诱导棉花愈伤快速生长的处理方法

摘要

本发明公开了一种诱导棉花愈伤快速生长的处理方法，包括如下步骤：利用双氧水消毒处理棉花种子半小时，在超净台用灭菌水洗净双氧水后，用灭菌水浸泡种子，露白后种入MS培养基中，常规培养生长7天，取所得无菌幼苗下胚轴，农杆菌侵染后，转移放入共培养基上进行培养，黑暗条件下共培养48小时；共培养结束后，将所得的棉花下胚轴放入含有抗性筛选的愈伤诱导培养基中，置于单色蓝光下，16小时蓝光光照，8小时黑暗，间隔进行愈伤诱导，愈伤诱导结束后，待愈伤生长至约黄豆颗粒大小时，将获得的愈伤取下转入新鲜诱导培养基，继续增殖，直至进入胚型愈伤诱导阶段。本发明可有效加快植物愈伤诱导阶段的愈伤增殖生长，减少愈伤诱导周期。

主权项

一种诱导棉花愈伤快速生长的处理方法，其特征在于，在单色蓝光下处理诱导植物愈伤生长，包括如下步骤：S1、利用双氧水消毒处理棉花种子半小时，倒去双氧水，在超净台用灭菌水清洗2‑3次洗净双氧水后，用灭菌水浸泡种子24小时，露白后种入MS培养基中，常规培养生长7天，得无菌幼苗；S2、取所得无菌幼苗下胚轴，切段约1厘米，农杆菌侵染5‑10分钟后，倒掉农杆菌菌液，用无菌滤纸吸干残留菌液，转移放入共培养基上进行培养，该培养基为常规培养基，具体配方为MS 4g/L、KNO3 1g/L、葡萄糖25g/L、琼脂6g/L、2，4‑D、KT黑暗条件下共培养48小时；S3、共培养结束后，将所得的棉花下胚轴放入含有抗性筛选的愈伤诱导培养基中，具体配方为MS4g/L、KNO31g/L、葡萄糖25g/L、琼脂6g/L、2，4‑D、2，4‑D100ul/L、头孢0.5g/L，置于波长为450nm，光照强度为50‑140勒克斯的单色蓝光下，16小时蓝光光照，8小时黑暗，间隔进行愈伤诱导1‑2个月，期间根据需要换新鲜诱导培养基；具体配方为MS4g/L、KNO31g/L、葡萄糖25g/L、琼脂6g/L、2，4‑D、KT、筛选剂；S4、愈伤诱导约2‑3个月，待愈伤生长至约黄豆颗粒大小时，将获得的愈伤取下转入新诱导培养基中，具体配方为MS4g/L、KNO31g/L、葡萄糖25g/L、琼脂6g/L、2，4‑D100ul/L、KT100ul/L、头孢0.5g/L，培养7个月后，形成胚型愈伤。