[发明专利]一种短杆菌发酵生产琥珀酸的方法

摘要

本发明公开了一种短杆菌发酵生产琥珀酸的方法，该包括：活化菌种，发酵培养，获得含延胡索酸还原酶的混合液，构建电化学催化体系，通过电化学检测和高效液相色谱‑质谱分析电化学驱动延胡索酸代谢生成琥珀酸的效率。本方法工艺简单，生产周期短，操作简便，与传统催化途径相比，催化效率明显提高。

主权项

1.一种短杆菌发酵生产琥珀酸的方法，其具体步骤为：(1)活化培养：将短杆菌NJWGY2133单菌落接入活化培养基中，控制培养液体积装液量为15～25％，在转速为160～200r/min，活化培养温度为30～34℃下活化培养2～3天后，获得种子液；(2)发酵培养：以2～10％的体积接种量将步骤(1)种子液接种于发酵培养基中，在转速为160～200r/min，发酵培养温度为30～34℃下发酵培养2～3天后，离心获菌丝体，超声破碎，冷冻离心，获得含有延胡索酸还原酶的混合液；(3)构建电化学催化体系：将步骤(2)获得的混合液固定在玻碳电极表面后的玻碳电极作为工作电极，铂丝电极作为对电极，饱和甘汞电极作为参比电极，电极池液是磷酸盐缓冲液，构建催化体系；连接电化学工作站，设置参数为：初始电位为‑0.2～‑1V，高电位为0.8～1V，低电位为‑0.2～‑1V，起始扫描极性positive，扫描速度为0.1～0.2V/s，扫描段数为2～3W，采样间隔为0.001～0.002V，静置时间为2～3s，灵敏度为1.e^‑004～1.e^‑006A/V；在电极池液中加入体积量为电极池液的10～20％的延胡索酸液，点击开始采样，待采样结束即酶反应达到饱和状态，得到含琥珀酸的电极池液；其中延胡索酸液的浓度为1～2mol/L；(4)回收：将步骤(3)得到的含琥珀酸的电解池液浓缩、萃取、结晶，即得到琥珀酸。