[发明专利]实现植物基因组外源序列定点整合的方法在审
| 申请号： | 201610602370.1 | 申请日： | 2016-07-27 |
| 公开（公告）号： | CN106244621A | 公开（公告）日： | 2016-12-21 |
| 发明（设计）人： | 宋书锋;李新奇;李莉;张大兵;符习勤;袁定阳;袁隆平 | 申请（专利权）人： | 湖南杂交水稻研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00 |
| 代理公司： | 北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙)11369 | 代理人： | 史霞 |
| 地址： | 410125*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种实现植物基因组外源基因定点整合的方法，包括如下步骤：步骤一、构建能够在植株基因组的目的整合位点区域进行基因组编辑的打靶载体，该打靶载体包括整合靶位点序列和Cas9核酸酶表达元件；步骤二、构建外源基因转化载体，并将该外源基因转化载体随机整合到植株的基因组中，得到转化有该外源基因的转基因株系，其中，外源基因转化载体包含整合位点序列和与目的整合位点两翼相同的同源臂序列，且该同源臂序列位于整合位点序列和外源基因之间；步骤三、将打靶载体转化入转基因株系内，筛选得到只含有定点整合到目的整合位点区域的株系。本发明能够提高植物定点整合外源基因的成功率。 | ||
| 搜索关键词： | 实现 植物 基因组 序列 定点 整合 方法 | ||
【主权项】：
一种实现植物基因组外源基因定点整合的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、构建能够在植株基因组的目的整合位点区域进行基因组编辑的打靶载体，该打靶载体包括整合靶位点序列和Cas9核酸酶表达元件；步骤二、构建外源基因转化载体，并将该外源基因转化载体随机整合到植株的基因组中，得到转化有该外源基因的转基因株系，其中，所述外源基因转化载体包含整合位点序列和；和与所述目的整合位点两翼相同的同源臂序列，且该同源臂序列位于所述整合位点序列和所述外源基因之间；步骤三、将步骤一中构建的所述打靶载体转化导入步骤二中得到的转基因株系内，筛选得到只含有定点整合到所述目的整合位点区域的株系。
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