[发明专利]一种淋巴瘤相关的融合基因的联合检测方法及诊断试剂盒

摘要

本发明涉及一种淋巴瘤相关的融合基因的联合检测方法及诊断试剂盒，通过以淋巴瘤患者Bcl‑2/lgH融合基因的纯化作为标准品，淋巴瘤患者骨髓和外周血样本，建立SYBR Green 1荧光染料实时定量PCR，所述的方法及试剂盒具有高灵敏度、稳定性好、检测快速、准确的，重复性好的优点，为在淋巴瘤中展开定量检测Bcl‑2/lgH融合基因的应用研究奠定基础。

主权项

一种淋巴瘤相关的融合基因的联合检测方法，其特征在于，该淋巴瘤相关的融合基因的联合检测方法包括：Gene Amp 5700 Sequence Detector定量PCR扩增仪，诊断试剂盒，Gene Amp 5700 SDS配备分析软件及Gel 1000紫外图像分析系统及配套分析软件；所述淋巴瘤相关的融合基因的联合检测方法为：模板DNA的提取及目的的片段扩增采集淋巴瘤患者百分之二的EDTA抗凝外周血和骨髓标本，常规提取基因组DNA，测定纯度及含量并于零下二百摄氏度冷存备用；反应程序为：95摄氏度10min预变性，然后95摄氏度45s变性、72摄氏度45s延伸，重复35个循环，最后72摄氏度5min延伸，4摄氏度终止反应，对不同退火温度和模板浓度进行试验，以优化PCR条件；所述的PCR反应体系的基本组成为：模板DNA 1‑2ul，SYBR Green Realtime PCR Master Mix25，MBR/lgH的上下游引物各2ul，Tap酶0.5ul，灭菌双蒸水补足50ul的总体积；试剂盒采用HotStarTaq DNA Polymerase作为热启动酶，扩增反应体系为：每50μl中含5μl的10倍扩增缓冲液、2μl浓度为25mM的Mg2+、2μl浓度为10mM的dNTPs、1.5μl浓度为10μM的正向引物、1.5μl浓度为10μM的反向引物、0.3μl的Taq DNA聚合酶、1μl的DNA模板、余量为mH2O，测序反应体系为：4μl的BigdyeV3.1、3μl的mH2O、1μl浓度为10μM的Sequencing引物(F，R)、2μl的PCR产物。