[发明专利]草莓花粉脱毒组培苗的移栽驯化方法

摘要

本发明公开了草莓花药脱毒组培苗的移栽驯化方法，包括以下步骤：1）花粉采集与清洗消毒，2）诱导分化成苗，3）幼苗快繁与生根，4）出苗与洗苗，5）移栽，6）驯化。本发明的有益效果为：本发明提供的方法，无须练苗，直接洗净培养基即可进行移栽，在苗床上搭建塑料拱棚，封闭三天后有效控制拱膜中温度、基质湿度、光照时间和强度，花粉脱毒组培苗的成活率可达100%，获得无病毒株的概率大幅提高；同时，草莓花粉脱毒率能达100%，可以不用病毒检测程序，缩短了从脱毒到规模生产种苗的周期，有效降低了生产成本与劳动成本，大幅度提高生产效益，提供了大批量的优质脱毒种苗，为草莓可持续产业化健康发展提供了技术支撑。

主权项

1.草莓花粉脱毒组培苗的移栽驯化方法，其特征在于，包括以下步骤：1）草莓花粉的取材与清洗消毒：采用田间草莓花粉发育至4mm～6mm大小的单核靠边期的花药，花粉单核靠边期的草莓花蕾形态是：花萼未开放，花蕾略长于花冠或花冠刚露白、花冠白色或者淡绿且不松动、花药微黄而充实；将采取的新鲜花药放在2 ℃～4 ℃中储藏24h后，用自来水将花药表面冲洗干净；冲洗过的花药移入超净工作台上放入无菌烧杯中，先用75%酒精消毒30 s～40 s，无菌水冲洗2遍～3遍，再用0.1%的升汞溶液消毒4 min～5 min，用灭菌过的玻璃棒顺一个方向轻轻搅动，然后用无菌水冲洗4遍～5遍，每次1分钟，迅速用滤纸吸干，得到无菌花药；2）花药愈伤组织的诱导及茎叶分化：在无菌条件下，用无菌针将已消毒的花蕾固定在已经灭菌过的大橡皮上；用已灭菌的解剖刀和解剖针剥开花蕾，取出花药，将取出的花药接种到装有愈伤组织诱导培养基上，愈伤组织诱导培养基组成为：MS+ BA 1.5 mg/L～2.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L～0.25mg/L+3%蔗糖+6 g/L～8 g/L琼脂，pH值为5.8；当愈伤组织的直径2 mm～3 mm时，转入分化培养基中，分化培养基组成为：MS+ BA 0.08 mg/L～0.12mg／L+IBA 0.8 mg/L～1.2 mg/L+3%蔗糖+6 g／L～8 g／L琼脂，pH值为5.8，当形成明显的丛生芽时将芽切成小块，接种于丛生增殖培养基上进行增殖，丛生增殖培养基组成为：MS+BA 1.2 mg/L～1.8 mg/L+NAA 0.08 mg/L～0.12 mg/L+3%蔗糖+6 g／L～8 g／L琼脂，pH值为5.8；3）脱毒组培苗快繁及生根培养：在脱毒组培苗快繁及生根培养之前，采用酶联免疫吸附法，即ELISA法进行病毒检测；再将步骤2）得到的脱毒苗放入增殖培养基中25d～35d长成丛生瓶苗；增殖培养基为加入6‑苄氨基腺嘌呤0.19 mg/L～0.21 mg/L的MS培养基；将高3cm、生长健壮的无根苗接种于MS培养基上，2周后，苗基部长出辐射状的白色小根，每株生根5条～7条，3周后，根生长1 cm～1．5cm，用于移栽；4）移栽前基质准备：基质的组成为：按照重量比草炭：珍珠岩：蛭石=3：1：1；在移苗前1天，将混合好、已润湿的基质装入32、50 穴的穴盘或直径9～12cm的营养钵中，轻压；用50%的可湿性多菌灵粉剂1000 倍液浇透，第二天移苗时，基质含水量为70%～80 %，即适合移苗；5）出瓶洗苗分级：起苗前用75 %酒精棉将所用操作工具全部消毒，直接从培养室移出生根的组培瓶苗到洗涤室，用直径1cm工具把组培苗从瓶中拣出，置于25℃～28℃的清水中洗净根部的培养基，不要伤到根系、嫩芽及叶片，然后按大小将幼苗分级，并分出无根苗；6）移栽：当天把洗净分级的组培苗运到种苗苗圃网室然后 进行移栽，用准备好的工具在穴盘的基质上插洞，将幼苗根部轻轻放入洞中，轻轻掩上，稍压实；移完后用喷雾器轻喷水，冲洗幼苗叶片上的基质，使得根系与基质接触更紧密，以利于根系生长；对于无根苗，先沾适宜浓度：NAA 0.05mg/L～0.1mg/L或IBA 0.8 mg/L～1.0 mg/L的生根粉或生根剂，再移植，或移植后用浓度为800 倍液的生根粉进行灌根；7）驯化：移栽完当天须在苗床上搭建塑料小拱棚，密封3d后每天早上或傍晚掀膜30min，从侧面揭膜面积的10%，开始驯化组培苗；随后每天揭膜时间增加10min,揭膜面积增加10%；视环境中的温度高低和育苗基质含水量适当增加光照通风透气时间，10d～15 d后可揭去薄膜；移植后需进行遮光管理，移植后的前2d用遮阳网遮光60%～70%，之后的10 d～14d 逐渐见光，直至不遮光；驯化的组培苗成活率达100%，30d后便可移至直径为10cm的营养钵或育苗床进行培育。