[发明专利]高效获取脂肪间充质干细胞的培养方法有效
| 申请号： | 201610605996.8 | 申请日： | 2016-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN106222134A | 公开（公告）日： | 2016-12-14 |
| 发明（设计）人： | 王晶;李亚平;谷广其;邱丽媛;赵进军;何文丽 | 申请（专利权）人： | 中卫华医（北京）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 101111 北京市大兴区经济技术*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种高效获取脂肪间充质干细胞的培养方法，为解决现有技术获得细胞活率低问题，包括以下步骤脂肪间充质干细胞的分离：脂肪组织用D.Hanks冲洗，并检测确保无污染，加入数倍体积的I型胶原酶和trypLETM消化酶溶液混合物，进行37℃、旋转振荡消化数十分钟后停止酶解；离心弃去上清液；并用筛网过滤，得脂肪间充质干细胞悬液；脂肪间充质干细胞的培养：将上述步骤获得的脂肪间充质干细胞悬液接种到培养瓶无血培养基中，进行原代细胞培养，培养期间多次倒置相差显微镜观察，并更换新鲜培养基；细胞培养到80‑90％融合时，用trypLETM消化后扩展接种到新培养瓶中培养，经过数次传代，得到纯化的间充质干细胞。具有消化更充分，细胞得率更高，保护间充质干细胞不受损伤，高活率的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 高效 获取 脂肪 间充质 干细胞 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种高效获取脂肪间充质干细胞的培养方法，其特征在于包括以下步骤：(1)、脂肪间充质干细胞的分离：将吸脂来源的脂肪组织用D.Hanks冲洗，洗去血细胞和混合的少量纤维结缔组织，同时对脂肪进行涂平板检测，确保实验前脂肪无污染；向冲洗检验后的脂肪组织中加入数倍体积的I型胶原酶和trypLETM消化酶溶液混合物，进行37℃、旋转振荡消化数十分钟后停止酶解；离心弃去上清液；并用筛网过滤，得脂肪间充质干细胞悬液；(2)、脂肪间充质干细胞的培养：将上述步骤获得的脂肪间充质干细胞悬液接种到培养瓶无血培养基中，置于37℃、饱和湿度、5％的CO2培养箱中进行原代细胞培养，培养期间多次倒置相差显微镜观察，并更换新鲜培养基；细胞培养到80‑90％融合时，用trypLETM消化后扩展接种到新培养瓶中培养，经过数次传代，得到纯化的间充质干细胞。
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