[发明专利]一种芝麻枯萎病菌毒素的提取方法

摘要

本发明属于植物病害预防技术领域，具体涉及一种芝麻枯萎病菌毒素的提取方法的专利申请。该方法包括菌株预培养、菌株培养、提取芝麻枯萎病菌毒素等步骤。本发明的创新点主要体现在（1）菌株培养时间足够长，确保能够产生芝麻枯萎病菌毒素，从而便于后续过程的制备和提取；（2）芝麻枯萎病菌毒素提取过程简便易行，提取效果稳定；本发明主要包括离心过滤、乙酸乙酯萃取和真空蒸发等简要的步骤，简便易行，具有较好可操作性；（3）为芝麻抗性研究奠定了良好基础；通过提取芝麻枯萎病菌毒素，并依此建立一种评价模型，可为准确评价芝麻枯萎病菌对芝麻生长影响奠定基础，同时也可为芝麻抗枯萎病机理研究及抗芝麻枯萎病种质资源的筛选奠定基础。

主权项

一种芝麻枯萎病菌毒素提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）菌株预培养，具体为：将芝麻枯萎病菌菌株接种在PDA平板培养基上，培养，检查菌株活性；然后，沿菌落边缘打出菌片，接入PD培养液，震荡培养；（2）菌株培养，具体为：对步骤（1）中培养结束后菌液进行过滤，滤液作为接菌母液；将接菌母液接入理查德培养基，恒温震荡培养40~50d；（3）提取芝麻枯萎病菌毒素，具体为：首先，将步骤（2）中培养液进行过滤，滤液离心，取上清液；其次，将上述上清液滴加于装有0.45μm水系滤膜的溶剂过滤器中，真空抽滤，收集滤液，并用盐酸溶液调节pH=3.0~3.5；最后，向滤液中加入有机萃取剂进行萃取；取上层有机相，进行真空旋转蒸发，最终得棕黄色固体产品，即为含有芝麻枯萎病菌毒素的粗产品。