[发明专利]利用分子荧光差异加标测定蛋黄、VB2药片中核黄素的方法

摘要

一种利用分子荧光差异加标测定蛋黄、VB₂药片中核黄素的方法，无需绘制工作曲线，只需通过两个差异加标的试液即可快速获得待测组分的质量分数，测定过程中完全消除了样品背景干扰，同时，采用向两个同体积试液中加入不同量的标准溶液，样品中因被测组分浓度不同可能因发生聚合、离解、光解等副反应所引入的测定误差可获得补偿或扣除，测定准确度进一步得到保障和提高。本发明方法检出限为5.76ng/mL，定量限为1.92×10^‑2μg/mL。

主权项

1.一种利用分子荧光差异加标测定蛋黄、VB2药片中核黄素的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)提取液制备：取样品研磨，称取m样，加入0.09‑0.11moL/L盐酸，蛋黄与盐酸溶液的质量体积比为1:2.6‑4，单位为g/mL，VB2药片与盐酸溶液的质量体积比为1:1200‑1600，单位为g/mL，压力水解提取，压力为8.0×104‑12.0×104Pa，时间为20‑40min，然后用NaOH溶液调节pH至4.5‑7.5，蛋黄试液中加入木瓜蛋白酶溶液，木瓜蛋白酶加入量为蛋黄质量的0.13‑0.16％，VB2药片试液中加入淀粉酶溶液，淀粉酶加入量为VB2药片质量的50‑70％，然后在37‑39℃保温15‑17h进行酶解；酶解液过滤，滤液定容至V样1；(2)测定液制备：从V样1中取至少四份相同体积V样2的过滤试液，向第一份和第二份加入不同体积的核黄素标准溶液，核黄素标准溶液质量体积浓度为ρ，第二份标准溶液体积V 标2大于第一份V标1，第四份加入低亚硫酸钠将核黄素还原为无荧光物质，作为空白，第三份既不加标准溶液，也不加低亚硫酸钠，为原过滤试液；各管加水至V，然后加3‑3.5％V的冰乙酸混匀，然后加入3‑3.5％V的高锰酸钾溶液，高锰酸钾溶液浓度为25‑35g/L，混匀，静置，滴加双氧水溶液至高锰酸钾颜色褪去，振摇，使多余氧气逸出，定容为V1；(3)测定：使用核黄素标准溶液在荧光分光光度计下扫描图谱，根据图谱获得最大激发波长和最大荧光发射波长，将(1)处理好的试液在最大激发波长和最大荧光发射波长下测定，第一份加标试液相对发光值为I标1，第二份加标试液相对发光值为I标2，第三份待测样品试液相对发光值为I样，第四份本底空白背景相对发光值为I0，蛋黄或VB2药片中核黄素的质量分数ω如式(1)； （1）。