[发明专利]一种MC3R基因敲除猪的制备方法有效
| 申请号： | 201610614586.X | 申请日： | 2016-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN106191113B | 公开（公告）日： | 2020-01-14 |
| 发明（设计）人： | 李秋艳;徐邢宾;郝海阳;张瑾;李志远;罗洁 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 11245 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关畅;任凤华 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种MC3R基因敲除猪的制备方法。本发明公开的MC3R基因敲除猪的制备方法采用CRISPR/Cas9系统进行，CRISPR/Cas9系统中包含gRNA1的编码基因和gRNA2的编码基因，gRNA1识别MC3R基因的靶序列为序列表中序列1；所述gRNA2识别MC3R基因的靶序列为序列表中序列2。实验证明，利用本发明的MC3R基因敲除猪的制备方法敲除MC3R基因的效率达到29.16％，并且本发明的方法能够快速高效的将目的基因大片段敲除，并且不留下外源基因片段，不仅可以用来研究MC3R基因的作用机制和机理，还可以用于动物育种。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 mc3r 基因 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.敲除动物细胞中MC3R基因的方法，其特征在于：所述方法采用CRISPR/Cas9系统进行，所述CRISPR/Cas9系统中包含gRNA1的编码基因和gRNA4的编码基因， 所述gRNA1识别MC3R基因的靶序列为靶序列1；所述gRNA2识别MC3R基因的靶序列为靶序列2；/n所述动物细胞为猪细胞；/n所述方法包括向动物细胞中导入所述gRNA1的编码基因和gRNA2的编码基因，得到敲除MC3R基因的动物细胞；/n所述gRNA1的编码基因通过含有所述gRNA1的编码基因的表达盒导入所述动物细胞中；所述gRNA2的编码基因通过含有所述gRNA2的编码基因的表达盒导入所述动物细胞中；所述CRISPR/Cas9系统还包括Cas9的编码基因，所述Cas9的编码基因通过含有所述Cas9的编码基因的表达盒导入所述动物细胞中；/n将CACCGgcattcattgctcacggccg和AAACcggccgtgagcaatgaatgcC退火形成双链，BbsI酶酶切后，连接到BbsI酶酶切pX330载体后得到的pX330骨架载体上得到的含有靶序列1的重组载体命名为pX330-target1， pX330-target1表达的gRNA即为gRNA1；/n将CACCGggagaccatcatgatcgccg和AAACcggcgatcatgatggtctccC退火形成双链，BbsI酶酶切后，连接到BbsI酶酶切pX330载体后得到的pX330骨架载体上得到的含有靶序列4的重组载体命名为pX330-target4， pX330-target4表达的gRNA即为gRNA4。/n
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国农业大学，未经中国农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201610614586.X/，转载请声明来源钻瓜专利网。
