[发明专利]一种基于表面等离子体共振技术的核酸检测方法

摘要

本发明公开了一种基于表面等离子体共振技术的核酸检测方法，首先在裸SPR芯片表面电沉积氧化石墨烯，再通过共轭作用吸附胺基三乙酸接枝的苝衍生物活性化分子层，组装5′端生物素化的捕获cDNA探针作为传感界面对目标tDNA进行检测，实现对tDNA的结合捕捉后，加入3′端生物素化的响应rDNA形成长链dsDNA并暴露其生物素分子，结合亲和素化辣根过氧化物酶以完成组装，最后加入苯胺和双氧水混合溶液，利用辣根过氧化物酶催化苯胺聚合沉积反应形成聚苯胺，根据SPR信号实现目标核酸的检测。本发明利用二维纳米材料进行“自下而上”的建构、与置顶“自上而下”的重量反应器形成具有双重增敏信号的SPR传感平台，能够实现对目标DNA的特异性和灵敏性检测，检测限可达飞摩尔水平。

主权项

一种基于表面等离子体共振技术的核酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，裸SPR芯片预处理：将裸SPR芯片依次浸泡在水虎鱼酸溶液、煮沸的H₂O₂和氨水的混合溶液中，清洗干净；步骤2，将氧化石墨烯超声分散于Na₂SO₄溶液中，得到浓度为0.3～0.6mg·mL^‑1的氧化石墨烯分散液，之后利用循环伏安法在预处理后的SPR芯片上电沉积氧化石墨烯，循环电压为‑1.5～+0.5V，循环速度为50mV s^‑1，循环次数为400～600圈；步骤3，将胺基三乙酸接枝的苝衍生物的二甲基甲酰胺溶液散布在步骤2得到的芯片上，孵育后用二甲基甲酰胺除去未连接的反应物；步骤4，将含有Ni(ClO₄)₂的乙酸缓冲液滴涂到步骤3得到的芯片上，静置后冲洗干净；步骤5，将含有浓度为0.1～5μM、5′端标记生物素的cDNA的磷酸缓冲液和乙醇胺封闭剂滴涂到步骤4得到的芯片上，孵育后冲洗干净得到cDNA/NTPy/rGO传感界面；步骤6，将待检测的tDNA加入到步骤5得到的芯片上，孵育后冲洗干净；步骤7，将含有浓度为0.1～5μM、3′端标记生物素的、与tDNA的单链残基互补配对的rDNA的磷酸缓冲液加入到步骤6得到的芯片上，孵育后冲洗干净，加入亲和素化辣根过氧化物酶，SPR信号稳定后得到HRP‑SA/rDNA/dsDNA/NTPy/rGO；步骤8，将含有摩尔比为5～15:1的苯胺与H₂O₂的乙酸缓冲液加入到步骤7得到的芯片上，进行氧化还原反应，记录SPR信号，待信号稳定后，根据tDNA的浓度与SPR信号的线性关系，最终计算得到待检测的tDNA的浓度。