[发明专利]一种从大豆干细胞培养物中提取植物甾醇的方法有效

专利信息
申请号: 201610623806.5 申请日: 2016-08-02
公开(公告)号: CN106236818B 公开(公告)日: 2019-05-17
发明(设计)人: 张合亮;袁立军;刘颖 申请(专利权)人: 宝健(北京)生物技术有限公司
主分类号: C07J75/00 分类号: C07J75/00;C07J9/00
代理公司: 北京正理专利代理有限公司 11257 代理人: 赵晓丹;张文祎
地址: 100176 北京市大兴区*** 国省代码: 北京;11
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摘要: 发明公开了一种从大豆干细胞培养物中提取植物甾醇的方法。该方法包括:将大豆干细胞培养物冻干,粉碎,进行亚临界萃取,得到萃取物粗品;然后结晶纯化,得到植物甾醇精品。本发明首次以含有高含量植物甾醇的大豆干细胞培养物为原料提取制备植物甾醇,为植物甾醇的提取提供了一种新途径;此外,本发明将亚临界萃取技术应用于植物甾醇的提取方面,不仅安全性高,而且能缩短生产周期,成本低,可得到较高的提取效率。
搜索关键词: 一种 大豆 干细胞 培养 提取 植物 方法
【主权项】:
1.一种从大豆干细胞培养物中提取植物甾醇的方法,其特征在于,该方法包括:(1)将大豆干细胞培养物冻干,粉碎过20~80目筛,送入亚临界萃取器中,密闭萃取器,控制萃取器内的真空度至‑0.5~‑0.8MPa;(2)打入液化的萃取溶剂进行逆流萃取;料液比为1∶5~20,萃取温度35~70℃,萃取时间30~60min,萃取压力0.1~1.0MPa,萃取次数2~4次;(3)萃取结束后将萃取液打入蒸发罐,去除溶剂,得到萃取物粗品;(4)将萃取物粗品进行结晶纯化,得到植物甾醇;其中,结晶纯化的步骤:取所述萃取物粗品,加入乙酸乙酯,料液比1∶3~10,用磁力搅拌器一边加热一边搅拌,加热温度控制在35~50℃,待样品完全溶解后停止加热和搅拌,自然降温结晶,降至室温后维持1~3h,抽滤得到植物甾醇精品;其中,大豆干细胞培养物是通过下述方法制备获得的:(a)将大豆种子用乙醇溶液浸泡,无菌水冲洗后,再用次氯酸钠溶液浸泡,然后无菌水冲洗,获得无菌大豆;(b)取上述无菌大豆的下胚轴,将其切成长度为1.5‑2.5mm,获取无菌大豆组织;(c)将获得的无菌大豆组织,接种于诱导培养基进行诱导培养,获得愈伤组织,其中,1g无菌大豆组织接种于25‑35 mL的诱导培养基;(d)将上述获得的愈伤组织,接种于增殖培养基,摇床培养,同时于第2天开始进行稳态磁场干预,即可获得富含植物甾醇的大豆干细胞培养物;所述诱导培养基为含8‑28mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸、15‑17mg/L柠檬酸铵和0.1‑0.5mg/L 萘乙酸的MS培养基,pH调至6.0‑6.3;所述增殖培养基为含8‑28 mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸、1.5‑2.5 mg/L的蔗糖和0.1‑0.5 mg/L水解酪蛋白的MS培养基,pH调至6.8‑7.0;所述诱导培养为暗培养,温度为30‑32℃,6‑7天为一个培养周期;所述增殖培养温度为30‑32℃,光照10‑12h/d,摇床培养转速为110‑130r/min,7天为一个培养周期;在增殖培养中,稳态磁场干预具体参数为每个培养周期中加载稳态磁场5‑6天,每天曝磁6‑8h,强度为0.9‑3T。
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