[发明专利]一种富含植物甾醇的大豆干细胞培养物的培养方法

摘要

本发明公开了一种富含植物甾醇的大豆干细胞培养物的培养方法。该方法包括以下步骤：(1)获取无菌大豆；(2)取上述无菌大豆的下胚轴，将其切成长度为1.5‑2.5mm，获取无菌大豆组织；(3)将获得的无菌大豆组织进行诱导培养，获得愈伤组织；(4)高温胁迫协同稳态磁场诱导大豆干细胞培养物富集植物甾醇。利用该方法可获得安全无污染的富含植物甾醇的大豆干细胞培养物，培养周期短、安全高效，为植物甾醇的获取提供了一种新途径，可供各领域研究与应用。

主权项

1.一种富含植物甾醇的大豆干细胞培养物的培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）将大豆种子用乙醇溶液浸泡，无菌水冲洗后，再用次氯酸钠溶液浸泡，然后无菌水冲洗，获得无菌大豆；（2）取上述无菌大豆的下胚轴，将其切成长度为1.5‑2.5mm，获取无菌大豆组织；（3）将获得的无菌大豆组织，接种于诱导培养基进行诱导培养，获得愈伤组织，其中，1g无菌大豆组织接种于25‑35 mL的诱导培养基；（4）将上述获得的愈伤组织，接种于增殖培养基，摇床培养，同时于第2天开始进行稳态磁场干预，即可获得富含植物甾醇的大豆干细胞培养物；所述增殖培养温度为30‑32℃，光照10‑12h/d，摇床培养转速为110‑130r/min，7天为一个培养周期，培养2‑3个培养周期；稳态磁场干预具体参数为每个培养周期加载稳态磁场5‑6天，每天曝磁6‑8h，强度为0.9‑3T；所述诱导培养基为含8‑28mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸、15‑17mg/L柠檬酸铵和0.1‑0.5mg/L 萘乙酸的MS培养基，pH调至6.0‑6.3；所述增殖培养基为含8‑28 mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸、1.5‑2.5 mg/L的蔗糖和0.1‑0.5 mg/L水解酪蛋白的MS培养基，pH调至6.8‑7.0。