[发明专利]一种同时测定贝类中谷胱甘肽和游离氨基酸的方法

摘要

本发明属于化学分析检测领域，特别涉及同时测定贝类中谷胱甘肽和游离氨基酸的方法。该方法优化了样品前处理，对分离树脂有保护作用，有利于分离，同时氨基酸提取效率更好，添加了抗氧化剂，防止谷胱甘肽被氧化,使用了自制的国产缓冲液和反应液，通过改变缓冲液的pH和洗脱程序，来消除峰型的相互重叠或相互影响。并且极大的降低了成本，消耗的成本为原试剂的十分之一，测量数据精确，测量种类更广泛。

主权项

1.一种同时测定贝类中谷胱甘肽和游离氨基酸的方法，包括如下步骤：(1)准确称量76.83mg谷胱甘肽标准品，用超纯水定容至100ml容量瓶中，即得2.5μmol/ml的标准溶液，从中准确取出2ml混合溶液，加入2ml2.5μmol/mL含有多种标准氨基酸组分的混合液，用超纯水定容至50ml，即为0.10μmol/mL的混合标准溶液，保存至4℃冰箱中；(2)准确称取1‑2g贝类肉组织，加入10‑20ml 0.02mol/L的稀盐酸，并添加1ml浓度为1‑4％的抗氧化剂，充分均质后用超声波清洗5min，然后用冷冻离心机，4℃5000‑10000r离心10min，收取上清液，将剩余残渣加入10ml0.02‑0.04mol/L稀盐酸后搅拌，再次4℃5000‑10000r离心5min，合并上清液，定容至50ml，定容后移取2ml，加入2ml 2‑5％的磺基水杨酸，4℃10000‑15000r离心10min，然后用0.22μm水相过滤膜过滤，全自动氨基酸分析仪测定，全自动氨基酸分析仪所需试剂包括缓冲液和茚三酮反应液，取3组平行实验，测定结果取平均值；所述氨基酸自动分析仪的参数条件:分离柱树脂为4.6mm×60mm阳离子交换树脂；分离柱温度为57℃；检测波长为570nm，脯氨酸为440nm；进样量20μL；缓冲液流速为0.35mL/min；茚三酮试剂流量0.35mL/min，单元温度135℃；所述缓冲液的洗脱程序：首先用B1试剂洗脱2.5‑3min，之后使用B2试剂洗脱2‑2.5min，然后用B3试剂洗脱8‑9min，再用B4试剂洗脱15‑15.5min，再用B5试剂洗脱3.5‑4.0min，再用B2试剂洗脱0.5‑1.0min，最后用B1试剂洗脱18.5‑19min；所述缓冲液的制备方法如下：S1：B1试剂的制备：称取二水柠檬酸钠6.0‑6.40g、1mol/L氢氧化钠6‑7ml、氯化钠5.66g、柠檬酸19.80‑21.50g、乙醇135.0ml，充分混合后用超纯水定容至1L，pH 3.1‑3.5；S2：B2试剂的制备：称取二水柠檬酸钠7.60‑7.80g、1mol/L氢氧化钠20‑22ml、氯化钠7.07g、柠檬酸22.00‑24.0g、乙醇25.0ml，充分混合后用超纯水定容至1L，pH 3.0‑3.6；S3：B3试剂的制备：称取二水柠檬酸钠13.20‑13.31g、氯化钠3.74g、柠檬酸12.80‑15.60g、乙醇9.0ml，充分混合后用超纯水定容至1L，pH 4.0‑4.4；S4：B 4试剂的制备：称取二水柠檬酸钠26.60‑26.80g、氯化钠54.35g、柠檬酸6.0‑6.30g充分混合后用超纯水定容至1L，pH 4.5‑5.5；S5：B5试剂的制备：称取氢氧化钠8.0‑10g、乙醇100.0ml，充分混合后用超纯水定容至1L。