[发明专利]一种无选择标记的株型改良的水稻育种新材料的获取方法

摘要

本发明公开了一种无选择标记的株型改良的水稻育种新材料的获取方法，构建以pCambia1300载体为模板扩增增强子序列，利用Giboson Assemble片段组装试剂盒将以上回收的四个片段连接成目的载体p35SBRD3；载体p35SBRD3转化水稻。本发明通过转基因可以实现有利于基因的快速聚合，但是目前可供选择的基因极其有限，而且与目前已报道的OsDWARF4基因和OsBRI1基因相比，BRD3基因参与BR代谢的降解途径，因此更易于实现BR在不同部位的微调；通过转基因技术精细调控BRD3基因在不同部位的表达水平，可以塑造理想的植物株型，增加作物产量。

主权项

一种无选择标记的株型改良的水稻育种新材料的获取方法，其特征在于，所述无选择标记的株型改良的水稻育种新材料的获取方法包括以下步骤：步骤一，利用带接头的35S增强子引物以pCambia1300载体为模板扩增增强子序列，琼脂糖电泳后切胶回收产物；步骤二，利用BRD3基因特异引物一以日本晴基因组序列为模板扩增位于PAC文库P0457B11中从36116到39724之间的序列；利用BRD3基因特异引物二以日本晴基因组序列为模板扩增位于PAC文库P0457B11中从39702到42978之间的序列，琼脂糖电泳后切胶回收以上产物；步骤三，利用EcoRI和HindIII双酶切双T‑DNA载体P1102，琼脂糖电泳后，回收大片段，利用Giboson Assemble片段组装试剂盒将以上回收的四个片段连接成目的载体p35SBRD3；步骤四，载体p35SBRD3转化水稻，鉴定后转入EH105农杆菌，通过农杆菌介导法转化野生型水稻品种中花11和明恢86，T0代植株单株收种，对T1代植株进行分子鉴定同时观察各单株的表型，筛选无选择标记的株型改良的水稻育种新材料。