[发明专利]一种基于碳点荧光“猝灭-恢复”的碱性磷酸酶测定方法

摘要

本发明提供了一种基于碳点荧光“猝灭‑恢复”的碱性磷酸酶的灵敏检测方法。利用简单的水热法制备的碳点毒性低且具有良好的水溶性和荧光性质。在高锰酸钾存在下，碳点荧光发生猝灭；而碱性磷酸酶(ALP)的水解产物抗坏血酸或对氨基苯酚能使猝灭的荧光重新得到恢复。利用ALP的高催化活性建立了一种新型荧光分析法实现了ALP的高灵敏检测。此方法原理新颖、灵敏度高、选择性好、操作简便快速且避免了荧光猝灭法中虚假信号的干扰，为基于碳点的生物检测应用拓宽了方向。

主权项

1.一种基于碳点荧光“猝灭‑恢复”的碱性磷酸酶测定方法，其特征在于：a、碳点的制备：将一定量的抗坏血酸或牛奶作为碳源与超纯水混合，这其中抗坏血酸的浓度为0.01–0.15 g/mL，牛奶与超纯水的体积比为1:1–1.25:1，搅拌形成均匀的溶液后转移至反应釜中，在180 ℃下加热一段时间，冷却后用二氯甲烷进行萃取或用微孔过滤器过滤得到的溶液用超纯水透析24 h作为荧光探针；b、碱性磷酸酶的测定：50 μL 0.1 mol/L的选自抗坏血酸磷酸三钠盐或对氨基苯磷酸钠盐的碱性磷酸酶底物溶液和50 μL不同浓度的碱性磷酸酶溶液加入到400 μL pH=8.5的Tris‑HCl缓冲液中，混合并反应25分钟后加入100 μL含有10 μM高锰酸钾和0.35 mg/L碳点的混合液；继续反应2 min后测定体系的荧光强度。