[发明专利]一种诱导罗汉果胚乳细胞成苗的方法

摘要

本发明公开了一种诱导罗汉果胚乳细胞成苗的方法，包括以下步骤：（1）果实筛选；（2）将步骤（1）得到罗汉果果实进行外表面消毒处理；（3）获取罗汉果种子并进行灭菌处理：（4）获取胚乳细胞：用无菌刀将灭菌处理过的种子的种壳切开，取出种子中的胚细胞，再用无菌镊子将胚细胞中的胚乳细胞取出，得到胚乳细胞；（5）制备培养基，培养基的组分为MS+（0.5~1.5）mg/L 6‑BA+（0.05~0.5）mg/L NAA。（6）接种培养：将步骤（4）中得到的胚乳细胞接种到步骤（5）制备得到的培养基中进行培养即可诱导成苗。本发明通过组织培养技术可以获得大量的无菌苗，繁殖速度快，植株结构完整，解决了罗汉果种子发芽率低，外植体组培诱导成苗染菌力成活率高的问题。

主权项

1.一种诱导罗汉果胚乳细胞成苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）果实筛选：采摘并筛选出健康、无病虫害的罗汉果果实；（2）将步骤（1）得到罗汉果果实进行外表面消毒处理；（3）获取罗汉果种子并进行灭菌处理：（4）获取胚乳细胞：用无菌刀将灭菌处理过的种子的种壳切开，取出种子中的胚细胞，再用无菌镊子将胚细胞中的胚乳细胞取出，得到胚乳细胞；（5）制备培养基：培养基的组分为MS+0.5~1.5mg/L 6‑BA+0.05~0.5mg/L NAA；（6）接种培养：将步骤（4）中得到的胚乳细胞接种到步骤（5）制备得到的培养基中进行培养，诱导成苗；步骤（1）中，所筛选的罗汉果果实，其成熟度为八成熟，即罗汉果果实的果皮颜色表现在青黄之间；所述的步骤（2）中，包括对未开裂的罗汉果果实进行外表面消毒、以及对开裂的罗汉果果进行外表面消毒，未开裂果实外表面具体消毒方法为：采用流动水冲洗30~60min，使表面的泥沙冲洗干净，之后放置于盛装有75%酒精的烧杯里消毒3~5min，再将消毒过的果实放置在无菌操作台上，再用浓度为0.1%HgCl2溶液对果实消毒3min，之后用无菌水清洗，再用浓度为75%酒精消毒5min，之后用无菌水清洗；开裂果实外表面具体消毒方法为：采用流动水冲洗30~60min，使表面的泥沙冲洗干净，之后放置于盛装有0.1%HgCl2溶液的烧杯里消毒3~5min，再将消毒过的果实放置在无菌操作台上，再用浓度为0.1%HgCl2溶液对果实消毒3min，之后用无菌水清洗，再用浓度为75%酒精消毒5min，之后用无菌水清洗；所述的步骤（3）的种子灭菌处理的方法为：将已消毒的果实用无菌刀切开果皮，取出种子放入已灭菌的烧杯中，用无菌水冲洗3~5次，将种子上的果肉冲洗掉，再将冲洗好的种子用浓度为75%酒精消毒30s，用无菌水清洗3~5次，再用浓度为0.1%HgCl2溶液消毒10min，用无菌水清洗3~5次。