[发明专利]16SrRNA多重测序文库的构建方法

摘要

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种16SrRNA多重测序文库的构建方法。所述的构建方法包括以下步骤：(1)、扩增PCR：使用引物F1和引物R1构成引物对，PCR扩增样品中的16SrRNA序列；(2)、建库PCR：使用引物F2和引物R2构成引物对，以步骤(1)获得的PCR产物为模板，进行PCR扩增。本发明提供的16SrRNA多重测序文库的构建方法获得测序文库测序反应得到的数据质量和平衡性更好，测序结果更加准确；可以实现的文库样品标记数量远大于现有技术；更加适用于土壤样品中细菌多样性的研究；大大提高了样品中细菌多样性研究的准确性。

主权项

1.一种16SrRNA多重测序文库的构建方法，其特征在于：所述的构建方法包括以下步骤：(1)、扩增PCR：使用引物F1和引物R1构成引物对，PCR扩增样品中的16SrRNA序列；(2)、建库PCR：使用引物F2和引物R2构成引物对，以步骤(1)获得的PCR产物为模板，进行PCR扩增；（3）、引物F1是含有如下所示的29个Index中的任意一个Index的16SrRNA的5’端扩增引物；（4）、16SrRNA的5’端扩增引物的序列为SEQ ID NO：1‑10所示的任意一条核苷酸序列，其中Index位于16SrRNA的5’端扩增引物的核苷酸序列中的第28和29个核苷酸之间；（5）、引物R1是含有如下所示的29个Index中的任意一个Index的16SrRNA的3’端扩增引物；（6）、16SrRNA的3’端扩增引物的序列为SEQ ID NO：11‑20所示的任意一条核苷酸序列，其中Index位于16SrRNA的3’端扩增引物的核苷酸序列中的第29和30个核苷酸之间；（7）、引物R2是在SEQ ID NO：21所示的核苷酸序列中包含了以下的29个Index中的任意一个Index而构成的核苷酸序列,其中Index位于SEQ ID NO：21所示的核苷酸序列中的第24和25个核苷酸之间；（8）、引物F2的序列为SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列；（9）、引物F1、引物R1和引物R2中包含的Index的序列为不同核苷酸序列；Index1：TGTACGCT；              Index2：GACTAGTC；Index4：ACTAGATG；              Index5：GATGTACA；Index6：TGATCTAC；              Index8：TATGTCAC；Index9：TCTAGCAT；              Index10：GATCACTA；Index11：GTGACTAT；             Index13：CATCAGAT；Index14：TACAGCGT；             Index15：ACTCATGA；Index17：CACGTGAT；             Index18：CATCGAGT；Index20：GTACATGA；             Index21：GTGATCAG；Index22：AGATCACG；             Index23：TGCACTAG；Index25：ATCAGACT；             Index26：AGATACTG；Index27：TCAGATAC；             Index28：TCGTGATA；Index29：TGACGTAG；             Index30：TGCTACAT；Index34：TCTACAGA；             Index35：CATCTGTA；Index37：CATGTCTA；             Index38：ATAGTGCT；Index39：CTGCGTAT。