[发明专利]丙氨酰谷氨酰胺注射液中一个四肽类杂质的分离制备方法

摘要

本发明公开了一种丙氨酰谷氨酰胺注射液中一个四肽类微量杂质的分离制备方法，包括以下步骤：1)、采用制备型高效液相色谱法对丙氨酰谷氨酰胺注射液中的四肽杂质进行预分离：高效液相色谱法以氨丙基键合硅胶为固定相，以乙腈‑甲酸铵缓冲液为流动相进行等度洗脱；该四肽类微量杂质的分子式为C₁₆H₂₇N₅O₈；2)、采用制备型高效液相色谱法对步骤1)所得到的四肽杂质粗品进行精制纯化：高效液相色谱法以氨丙基键合硅胶为固定相，以乙腈‑甲酸缓冲液为流动相进行等度洗脱；收集、合并目标馏分并冷冻干燥，得到纯化的四肽类杂质。

主权项

1.丙氨酰谷氨酰胺注射液中一个四肽类微量杂质的分离制备方法，其特征是包括以下步骤：1)、采用高效液相色谱法对丙氨酰谷氨酰胺注射液中的四肽杂质进行预分离：所述高效液相色谱法以氨丙基键合硅胶为固定相，以乙腈‑甲酸铵缓冲液为流动相进行等度洗脱，氨丙基键合硅胶的粒径为20～30μm，洗脱流速为40～60ml/min；该四肽类微量杂质的分子式为C16H27N5O8，氨基酸序列为：L‑Ala‑L‑Glu‑(L‑Ala‑L‑Gln)；通过紫外检测器的在线监测，收集、合并目标馏分并冷冻干燥，得四肽杂质粗品；步骤1)的流动相中，乙腈的体积含量均为30％～60％；流动相的pH值均为3.0～4.5；2)、采用高效液相色谱法对步骤1)所得到的四肽杂质粗品进行精制纯化：所述高效液相色谱法以氨丙基键合硅胶为固定相，以乙腈‑甲酸缓冲液为流动相进行等度洗脱，氨丙基键合硅胶的粒径≤7μm，洗脱流速为8～12ml/min；通过紫外检测器的在线监测，收集、合并目标馏分并冷冻干燥，得到纯化的四肽类杂质；步骤2)的流动相中，乙腈的体积含量为30％～60％。