[发明专利]MDCK细胞的冻存和复苏

摘要

MDCK细胞的冻存和复苏，它涉及MDCK细胞的冻存和复苏。本发明的冻存方法为：通过限制冻存液在与细胞混合中的加入速率，防止细胞损坏，并通过调整降温速率，防止细胞内产生冰晶，导致细胞死亡。并在细胞复苏中，快速进行复苏，保证了细胞的完整性，存活率。本发明的方法能够很好的保持MDCK细胞活力。本发明的复苏后的细胞活力达95％以上，保证了细胞质量，使其长期存活。

主权项

1.MDCK细胞的冻存方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：一、取传代培养至对数期的MDCK细胞，进行细胞消化培养后，离心，去上清，置于冰浴中，加入冻存液重悬细胞，至细胞密度达5×106/mL，得细胞冷冻液；其中，冻存液采用滴管沿冻存管壁滴加，滴加速度为：前3min按0.2mL/min的速度滴加，3～5min按0.5mL/min的速度滴加，剩余时间按0.75mL/min的速度滴加；二、在步骤一处理后，先将冷冻管降至4℃，然后以1.5℃/min的速度降至‑8℃，再取出放入‑10℃，然后以1.0℃/min的速度降至‑20℃，然后静置30min，再以0.5℃/min的速度降至‑80℃，最后放入液氮保存；所述的冻存液由体积百分含量为10％的DMSO和体积百分含量为90％的胎牛血清组成。