[发明专利]一种卡特兰组培快速繁殖方法

摘要

本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种卡特兰组培快速繁殖方法，包括以下步骤：材料选取、外植体预处理、外植体消毒、诱导培养、超声波处理、增殖培养、生根培养和移栽，通过本发明能对卡特兰进行快速培养繁殖，效率高，并且培养后的卡特兰苗株成苗率高，苗株品质好，栽培后适应性强，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养卡特兰提供了技术支持。同时本组培繁殖方法消毒效果好、褐变率低，从而大大提高了成苗率及工作效率，节约了资源。

主权项

一种卡特兰组培快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)材料选取：选取无病虫害长势良好的卡特兰植株，进行5～8d的遮光处理，遮光处理后，选取长势健壮植株上的新芽作为外植体；(2)外植体预处理：用抗氧化剂溶液洗涤刚切割的外植体花芽伤口表面；(3)外植体消毒：用软刷毛将选取的外植体花芽在水池中进行初步清洗，去除表面的泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min，然后在超净台上剥除外植体花芽最外面的一层苞叶，在经高温灭菌过的75％酒精中浸泡1～2s，然后在浸泡在10％的次氯酸钠溶液中初次消毒10min，初次消毒后，用无菌水冲洗5遍，再剥去一层苞叶，放入5％的次氯酸钠溶液中再次消毒5min，接着采用重复消毒的方式，每次次氯酸钠的浓度为上次消毒的一半，消毒时间也为上次消毒的一半，直至剥至留下最后的芽体，最后切取5mm左右的芽尖，泡在0.5％的次氯酸钠溶液中消毒1min，用无菌水冲洗6～8次，用消毒滤纸吸干表面水分后放置于培养皿中备用；(4)诱导培养：将消毒后的外植体，接种在诱导培养基中进行培养，先进行7～10d的弱光照培养，光照强度为500～700lx，然后在进行常规光照培养，光照强度为1500～2000lx，培养温度为24～26℃，光照时间为13h/d；所述诱导培养基为：1/2MS+0.4～0.8mg/L 6‑BA+0.05～0.08mg/L NAA+10～15g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+490～510mg/L柠檬酸+5～7g/L PVP，pH值为5.4～5.5；(5)超声波处理：将诱导出的原球茎放在频率为25kHz的超声波中处理3～4min；(6)增殖培养：超声波处理后转移至增殖培养基中继续培养，所述增殖培养基为：1/2MS+1～2mg/L 6‑BA+0.4～0.6mg/L NAA+10～15g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+490～510mg/L柠檬酸+2～4g/L PVP，pH值为5.4～5.5；培养温度25～28℃，光照时间为13h/d，光照强度为1500～2000lx；(7)生根培养：增殖培养后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入第一生根培养基中进行生根前期培养，所述第一生根培养基为：1/4MS+1.4～1.6mg/L 6‑BA+0.1～0.3mg/L NAA+28～33g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+2～4g/L PVP，pH值为5.4～5.5；培养时间为10d，培养条件：培养温度25～28℃，光照时间为13h/d，光照强度为1500～2000lx；生根前期培养结束后，转入第二生根培养基中继续培养，所述第二生根培养基为：1/4MS+28～33g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+8～12％香蕉汁+2～4g/L PVP+5～10％土豆泥，pH值为5.4～5.5；培养条件：培养温度25～28℃，光照时间为13h/d，光照强度为1500～2000lx；(8)移栽：当试管苗生长至4～5cm高，根2～4条，叶1～2片时，将试管苗放在自然光下炼苗5～7天，打开瓶盖炼苗1～2天；然后取出培养苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至培养基质中，保持湿度和通风，空气湿度为75～85％，温度为20～25℃。