[发明专利]一种羌活的组织培养繁殖方法

摘要

本发明涉及一种羌活的组织培养繁殖方法，包括如下步骤：S1、无菌基体的预处理：选择羌活萌发的根芽，经灭菌、消毒处理，得到无菌基体；S2、簇生芽培养：将无菌基体接种到初增殖培养基中，进行第一阶段培养；再接种到继代增殖培养基中，进行第二阶段培养，从而在根芽切口出培育出簇生芽；S3、簇生苗培养：将簇生芽接种于胚芽诱导培养基中，继续培养簇生芽20‑30天，得到簇生苗；S4、生根培养：将簇生苗仔细分株，并接种到生根培养基中，培养20‑26天，得到根系完整的独立羌活小苗。所述方法通过特定的培养步骤和特定技术特征的综合选择与协同促进效果，可对羌活进行快速繁殖，满足大规模种植的需求，具有良好的应用前景和潜力。

主权项

1.一种羌活的组织培养繁殖方法，所述方法包括如下步骤：S1：无菌基体的预处理选择羌活萌发的根芽，并经灭菌、消毒处理，得到无菌基体；S2：簇生芽培养将所述无菌基体接种到初增殖培养基中，进行第一阶段培养；然后再接种到继代增殖培养基中，进行第二阶段培养，从而在根芽切口处培育出簇生芽；S3：簇生苗培养将所述簇生芽接种于胚芽诱导培养基中，继续培养簇生芽20‑30天，从而得到簇生苗；S4：生根培养将簇生苗仔细分株，并接种到生根培养基中，培养20‑26天，得到根系完整的独立羌活小苗；所述步骤S2具体如下：S2‑1：将所述无菌基体接种到初增殖培养基中，在温度为16±2℃下，紫外光照射1‑2小时，然后以2000‑2500lux的光照强度照射8‑10小时，最后恢复暗期；如此循环处理15‑20天，完成第一阶段培养，得到初增殖基体；S2‑2：完成第一阶段培养后，将初增殖基体接种到继代增殖培养基中，将温度升高至25±1℃，并按照以一天为周期、以小时计的明期:暗期＝15:9交替进行光照和停止光照，光照时的光照强度为2900‑3100lux；如此循环处理10‑15天，完成第二阶段培养，得到簇生芽；在所述步骤S2‑1中，所述初增殖培养基的pH值为5.5，且每1000ml所述初增殖培养基包含如下含量的各种组分：2,4,5‑三氯苯氧乙酸0.5mg、6‑苄氨基腺嘌呤1.25mg、赤霉素1‑2mg、无机物混合液50ml、微量元素水溶液20ml、盐酸吡哆醇20‑30mg、柠檬酸8‑14mg、L‑脯氨酸10‑15mg、乙二醇5‑9mg、蔗糖8‑12mg和琼脂3‑4g；所述无机物混合液是将10g K2HPO4·3H2O、5g MgCl2、6g NaH2PO4、2g NH4Cl、3g NH4NO3、4g硼酸和3.5g KI加入到1000ml蒸馏水中搅拌溶解而得到的，从中量取50ml，即为1000ml所述初增殖培养基中所包含的50ml无机物混合液；所述微量元素水溶液是将4g钼酸钠、2g硫酸锌、3g硝酸铜、4g氯化钙、2g氯化钴、7g氯化锰、5g氯化亚铁、2g氯化铁和3g氯化铝溶解于1000ml蒸馏水中而得到的；在所述步骤S2‑2中，所述继代增殖培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，并添加有维生素C 0.8‑1.4mg/L、琼脂1‑2g/L、麦芽糖5‑8g/L和复合生长素0.4‑0.8mg/L而得到的培养基，且其pH值为5.8；所述复合生长素为质量比3‑5:1的6‑氨基腺嘌呤与2,4‑表油菜素内酯的混合物；所述步骤S3中，每1000ml所述胚芽诱导培养基包含如下含量的各种组分：异戊烯基腺嘌呤2‑4mg、吲哚‑3‑丁酸3‑3.5mg、乙二胺四乙酸二钠10‑15mg、肌醇8‑10mg、蛋白胨5‑8mg、无机物混合液40ml、微量元素水溶液25ml、白砂糖2‑3g、烟酸1‑2mg和琼脂1‑2g，且所述胚芽诱导培养基的pH值为5.6；所述步骤S4中，所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，并添加有氯吡苯脲0.4‑0.8mg/L、萘乙酸0.1‑0.3mg/L、琼脂2‑4g/L、蔗糖10‑15g/L、多效唑0.1‑0.2mg/L而得到的培养基，且所述生根培养基的pH值为5.2。