[发明专利]一种食管鳞状细胞癌前LGIEN和HGIEN的标记蛋白质的筛选方法有效
| 申请号： | 201610664536.2 | 申请日： | 2016-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN106324131B | 公开（公告）日： | 2019-01-22 |
| 发明（设计）人： | 储玮;李増山;贾娜;贾旭春;陈玲;胡思隽;张莹;肖黎明;郭勇 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06;G01N33/68;G01N33/574;G01N33/531 |
| 代理公司： | 西安恒泰知识产权代理事务所 61216 | 代理人： | 孙雅静 |
| 地址： | 710032 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种食管鳞状细胞癌前LGIEN和HGIEN的标记蛋白质的筛选方法。包括将食管鳞状细胞癌ESD术后的福尔马林固定石蜡包埋标本(FFPE标本)分别制作成HE玻片和PEN玻片，对HE玻片上的FFPE标本进行病理分级标记，将PEN玻片上的FFPE标本进行脱蜡水化处理，然后将分级标记的HE玻片上的分级区域拓印到脱蜡水化后的PEN玻片上；将拓印后的PEN玻片在激光显微切割仪下按照拓印区域进行切割分离，切割分离后的组织依次进行蛋白质的提取定量和蛋白质的纯化酶解得到各个分级区域的蛋白质；各个分级区域的蛋白质再通过四级杆轨道离子阱质谱进行质谱分析，将质谱分析结果通过MaxQuant software environment(version1.4.3.9)软件进行label‑free搜库分析得到蛋白质的比对结果和蛋白质筛选结果。 | ||
| 搜索关键词： | 玻片 蛋白质 分级 食管鳞状细胞癌 标记蛋白质 切割分离 质谱分析 脱蜡 拓印 标本 福尔马林 激光显微切割 石蜡包埋标本 筛选 蛋白质筛选 离子阱质谱 比对结果 病理分级 水化处理 拓印区域 水化 纯化酶 四级杆 术后 轨道 制作 分析 | ||
【主权项】：
1.一种食管鳞状细胞癌前LGIEN和HGIEN的标记蛋白质的筛选方法，其特征在于，包括将同一FFPE组织制作成至少两个玻片标本，其中一个玻片标本经HE染色后进行等级组织划分并标记，另一个玻片标本根据经HE染色后进行等级组织划分并标记的玻片标本上的划分区域进行组织切割得到各个等级组织的切割组织；所述的FFPE组织为食管鳞状细胞癌ESD术后的同一FFPE组织；所述的组织切割为LCM激光显微切割；之后对得到的各个等级组织的切割组织依次进行蛋白质的提取、定量、纯化与酶解得到各个等级组织的肽段；所述的蛋白质的提取采用PEB试剂进行提取，PEB试剂包括300mM的Tris‑HCL溶液，Tris‑HCL溶液中含有体积百分比为2％的SDS，Tris‑HCL溶液的pH＝8.0；最后将得到的各个等级组织的肽段分别经LC‑MS/MS进行质谱检测，对质谱检测结果进行统计学分析和生物信息学分析得到LGIEN和HGIEN的标记蛋白质。
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