[发明专利]一种茶叶中烟碱的手性分析方法

摘要

本发明公开了一种茶叶中烟碱的手性分析方法，其特征在于：将茶叶样品干燥、粉碎和过筛，加入萃取液萃取并过滤，经自动固相微萃取后进行多维气相色谱串联质谱分析，采用峰面积归一化法定量检测茶叶中S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱的比例。本方法提供的检测方法，样品处理简单快捷，方法检出限低，灵敏度高，精密度好，能够满足茶叶样品中烟碱的手性分析。

主权项

一种茶叶中烟碱的手性分析方法，其特征在于：将茶叶样品干燥、粉碎和过筛，加入萃取液萃取并过滤，经自动固相微萃取后进行多维气相色谱串联质谱分析，采用峰面积归一化法定量检测茶叶中S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱的比例；具体步骤如下：1)标准溶液的配制：分别称取100.0mg的S‑(‑)‑烟碱标准品、50.0mg的R‑(+)‑烟碱标准品，用正己烷配制S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱浓度分别为100μg/mL和50μg/mL的混合标准溶液，浓度为100μg/mL的S‑(‑)‑烟碱标准溶液，浓度为100μg/mL的R‑(+)‑烟碱标准溶液；2)茶叶样品的混匀：将茶叶样品置于40℃烘箱中，1小时后将茶叶取出，粉碎后过0.45毫米孔径标准筛；3)茶叶样品的萃取：称取约5g茶叶粉末，置于100mL锥形瓶中，加入20mL水，40mL正己烷和10mL 2mol/L氢氧化钠溶液，具塞震荡萃取1h后，将萃取液避光静置30min；取上层有机相，2000g离心10min后过0.22μm滤膜至螺纹瓶中待进样；4)多维气相色谱串联质谱分析：将步骤3)的过滤液再经自动固相微萃取后进行多维气相色谱串联质谱分析，具体条件如下：①自动固相微萃取条件：固定相：聚二甲基硅氧烷/二乙烯基苯即PDMS/DVB；样品加热温度30℃，预热3min，萃取时间5min，解吸5min，进样后在250℃烤针10min；②一维分析条件：色谱柱：30m×0.25mm×0.25μm，5％二苯基‑95％二甲基聚硅氧烷毛细管色谱柱；进样口温度：250℃。载气：氦气，纯度≥99.999％，恒压进样：117.9kPa；升温程序：初始温度80℃，平衡时间1min，以10℃/min的速率至200℃，保持10min；检测器：火焰离子化检测器(FID)；温度：280℃；氢气：40mL/min；空气：400mL/min；尾吹：10mL/min；切割压力为50.0kPa；③二维分析条件：色谱柱：30m×0.25mm×0.25μm环糊精毛细管色谱柱；升温程序：初始温度50℃，保持3min，以2℃/min的速率升至130℃，之后以3℃/min的速率升至180℃，保持1min；检测器：电子轰击源(EI)；离子源温度：200℃；接口温度：220℃；检测器电压相对于调谐结果0kV；溶剂延迟：3min；检测模式：选择离子检测模式(SIM)；定量离子84；5)采用对照标样与茶叶样品烟碱色谱峰的保留时间及特征离子进行S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱的定性分析，对定量离子峰面积进行归一化定量S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱占总烟碱的比例。