[发明专利]一种荧光增效的高通量硫氧还蛋白活性检测方法在审
| 申请号： | 201610683460.8 | 申请日： | 2016-08-17 |
| 公开（公告）号： | CN106092998A | 公开（公告）日： | 2016-11-09 |
| 发明（设计）人： | 梁巍;刘军;杜澄 | 申请（专利权）人： | 北京中科研源科技发展有限公司 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京太兆天元知识产权代理有限责任公司 11108 | 代理人： | 张洪年 |
| 地址： | 100190 北京市海淀区中*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种荧光增效的高通量硫氧还蛋白活性检测方法。所述方法的具体步骤为：1)配制测活液；2)测定Trx标准曲线；3)测活步骤：取样品和测活液放入孔中，在37℃下反应1小时，并测定各孔样品在反应前后520nm处的荧光强度；样品中的Trx活性＝(反应后的荧光强度–反应前的荧光强度)×稀释倍数，根据标准曲线对比，计算出样品中活性Trx含量；用Bradford法检测待测样品中的蛋白浓度，计算出一个样品单位重量蛋白中所含的Trx活力单位。与现有技术相比，本发明样本需求量少，特别适合血清、血浆检测，简化了检测操作步骤，降低了因检测程序复杂引入的检测结果的离散性、提高检测结果的准确性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 荧光 增效 通量 硫氧还蛋白 活性 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种荧光增效的高通量硫氧还蛋白活性检测方法，其特征在于，所述检测方法采用四种试剂，分别为检测缓冲液、酶溶液、底物液和标准品；所述检测缓冲液为NADPH、磷酸钾缓冲液；所述标准品为人硫氧还蛋白；所述酶溶液为牛硫氧还蛋白还原酶溶液；所述底物液为牛胰岛素溶液；所述方法的具体步骤为：1)配制测活液：现取检测缓冲液0.978ml、酶溶液0.09ml、底物液1.632ml，混合配制成测活液；2)测定硫氧还蛋白标准曲线：取检测缓冲液，在其中加入血清白蛋白，使血清白蛋白质量浓度为0.1％，得标准品稀释液；将人硫氧还蛋白用标准品稀释液配制成0、1、2、3、4、5μg/ml六个浓度，作为标准液样品；每个浓度标准液样品取20μl，进行测活操作；计算每一个标准液样品在反应前后在520nm处的荧光强度值之差，并制作出ΔA520nm对人硫氧还蛋白浓度的标准曲线；3)根据标准曲线对比，计算出样品中活性人硫氧还蛋白含量；用Bradford法检测待测样品中的蛋白浓度，计算出一个样品单位重量蛋白中所含的人硫氧还蛋白活力单位。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于北京中科研源科技发展有限公司，未经北京中科研源科技发展有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201610683460.8/，转载请声明来源钻瓜专利网。
