[发明专利]一种用于殊异支原体分离培养的培养基及其制备方法

摘要

本发明公开了一种用于殊异支原体分离培养的培养基，每1000ml培养基中包括有以下组分：PPLO肉汤8.5g、脑心浸出液8.5g、葡萄糖2.0g、Hank’s平衡盐溶液500 ml、25%新鲜酵母浸出液60 ml、无菌猪血清100 ml、无菌马血清100 ml、氨苄青霉素100 mg、10%醋酸铊1 ml；并提供了其制备方法。本发明的有益效果为：本发明提供的殊异支原体培养基与现有技术相比，活菌滴度可达10¹⁰ CCU/ml，而现有技术培养基生长滴度为10⁷‑10⁹ CCU/ml；继代培养殊异支原体，本发明培养基2‑3天可传代一次，而现有技术传代一次一般需要3‑5天，充分说明本发明提供的培养基具有生长快速、培养滴度高的特点，适用于殊异支原体的分离培养。

主权项

1.一种用于殊异支原体分离培养的培养基，其特征在于，所述培养基为液体培养基形式，每1000ml液体培养基是由以下组分制备得到的：PPLO肉汤8.5g、脑心浸出液8.5 g、葡萄糖2.0g、Hank’s平衡盐溶液500 ml、25%新鲜酵母浸出液60 ml、1%酚红2.5 ml、无菌猪血清100 ml、无菌马血清100 ml、氨苄青霉素100 mg、10% 醋酸铊1 ml、余量为去离子水；每1000ml液体培养基的制备方法为：1）称取脑心浸出液8.5 g加入到500 ml Hank’s平衡盐溶液中，加热溶解，再加入1%酚红2.5 ml，混合后115℃高压灭菌20分钟，作为A液；2）称取PPLO肉汤8.5 g、葡萄糖2.0 g，量取60 ml 25%新鲜酵母浸出液，加去离子水至 280 ml，混合后115℃高压灭菌20分钟，作为B液；3）待A液、B液晾至50℃‑55℃混合后，再在其中加入无菌猪血清和马血清各100 ml，再 加入滤过除菌100 mg/ml的氨苄青霉素1 ml和10%的灭菌醋酸铊1ml，用灭菌去离子水调至 1000 ml，用灭菌的1M NaOH调pH值到7.2‑7.4，充分摇匀，得到液体培养基，置4℃保存备用；所述25%新鲜酵母浸出液的制备方法为：取鲜酵母500g，加入去离子水2000 ml中，搅拌溶解，用盐酸溶液调pH值至4.5‑5.0，80℃水浴30分钟，3000 转/分离心20分钟，取上清液，将上清液用1 M NaOH调pH值至7.8‑8.0，煮沸，置室温放凉后用双层滤纸过滤，再补水至2000 ml，即得到25%新鲜酵母浸出液，‑20℃保存备用；所述盐酸溶液中，按照体积比浓盐酸：水为1：1；所述Hank’s平衡盐溶液的制备方法为：称取0.185 g氯化钙，加去离子水至 200 ml，115℃高压蒸气灭菌20分钟，作为A液；称取8.0 g氯化钠， 0.1 g硫酸镁，0.4 g氯化钾，0.1 g氯化镁，0.048 g磷酸氢二钠，0.06 g磷酸二氢钾，1.0 g葡萄糖，0.35 g碳酸氢钠，用800 ml去离子水溶解，115℃高压蒸气灭菌20分钟，作为B液；1 L的容量瓶中将A、B液无菌混合，加灭菌去离子水并定容至1000 ml，即得到所述Hank’s平衡盐溶液，置4℃保存备用；所述1%酚红溶液的制备方法为：称取酚红1.0 g，置玻璃研钵中，逐滴加入0.1M NaOH，研磨至完全溶解，将溶解的酚红吸入100 ml量瓶中，用去离子水洗下研钵中残留酚红 液至量瓶中，最后补加去离子水至100 ml，即可得到所述1%酚红溶液。