[发明专利]一种用于鱼类单殖吸虫的体外培养方法

摘要

本发明属于水产生物技术领域，具体涉及了一种用于鱼类单殖吸虫的体外培养方法。所述体外培养方法包括如下步骤：(1)无菌条件下，将经传代培养的细胞重悬于第一培养基中，调整细胞密度后转接于培养皿中，置于第一培养条件下培养，待细胞贴壁后，弃去所述第一培养基，加入第二培养基，待用；(2)将从鱼体剥离的单殖吸虫重悬于第二培养基，然后转接于步骤(1)所述培养皿中，于第二培养条件下培养，获得在体外存活的鱼类单殖吸虫。本发明解决了单殖吸虫必须寄生在鱼鳃或幼鱼鳍条上，无法离体存活的问题，不会像传统的单殖吸虫病研究受到流行季节的限制，因此具有缩短单殖吸虫病新药创制研究周期的作用。

主权项

1.一种用于鱼类单殖吸虫的体外培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）无菌条件下，将经传代培养的鲤鱼上皮细胞重悬于第一培养基中，调整细胞密度后转接于培养皿中，置于第一培养条件下培养，待细胞贴壁后，弃去所述第一培养基，加入第二培养基，待用；所述第一培养基为M199培养基、胎牛血清和抗生素的混合液，所述M199培养基和胎牛血清的体积比为9:1，所述抗生素为青霉素和链霉素的混合液，所述青霉素的工作浓度为100U/mL，所述链霉素的工作浓度为100μg/mL；所述第二培养基为第一培养基和细胞等渗液按体积比1:9~7:3混合所得混合液；所述细胞等渗液为质量分数为0.65%的NaCl溶液；所述单殖吸虫为指环虫；所述第一培养条件为：培养温度25℃，通入体积浓度为5% 的CO₂气体；（2）将从鱼体剥离的单殖吸虫重悬于第二培养基，然后转接于步骤（1）所述培养皿中，于第二培养条件下培养，获得在体外存活的鱼类单殖吸虫；所述第二培养条件为：培养温度25℃。