[发明专利]一种牛肠粘膜依诺肝素钠及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种牛肠粘膜依诺肝素钠及其制备方法与应用。牛肠粘膜依诺肝素钠由牛肠粘膜肝素制备而来，与USP39和EP8.6等药典规定的由猪肠粘膜肝素来源的依诺肝素钠不同，其呈现出典型的物种和器官来源（牛肠粘膜）特征。本发明同时介绍了两种牛肠粘膜依诺肝素钠注射剂和制备方法，以及在动物体内抗凝试验的应用。牛肠粘膜依诺肝素钠还具有猪来源依诺肝素钠所不具有的清真性，在广大穆斯林人群、国家和地区，有着巨大的市场。牛肠粘膜依诺肝素钠及其注射剂，可应用于抗凝、抗栓、抗炎、抗癌及清真药物。

主权项

1.一种牛肠粘膜依诺肝素钠的制备方法，其特征在于：取巴西市售的牛肠粘膜肝素钠，经全绵羊血浆法抗凝活性折干后为156.3单位每毫克；按USP39规定的精品肝素钠抗‑Ⅹa和抗‑Ⅱa活性测定方法，抗‑Ⅹa活性折干后仅为120.1单位每毫克，抗‑Ⅱa活性折干后为93.0单位每毫克，抗‑Ⅹa/抗‑Ⅱa比例为1.29；准确称取上述牛肠粘膜肝素钠80克，溶解于800毫升水中；另将200克苄索氯铵，溶解于800毫升水中，配制成澄清的苄索氯铵水溶液；于充分搅拌下，将苄索氯铵水溶液滴加至牛肠粘膜肝素钠水溶液中，30分钟内滴加完毕，继续搅拌2小时，用高速离心机6000转/分钟离心5分钟，沉淀用1600毫升水重悬，继续充分搅拌5分钟，再6000转/分钟离心5分钟，重复一次，沉淀的牛肠粘膜肝素季铵盐，45℃鼓风干燥10小时后，转移至真空干燥箱，在60℃下真空干燥48小时，干燥后的牛肠粘膜肝素季铵盐的干燥失重为0.5％，称重为232.5克；取上述干燥后的牛肠粘膜肝素季铵盐200克于2升反应瓶中，加入1300克二氯甲烷搅拌溶解，升温至38℃，加入220克氯化苄，全程保温30‑40℃，反应过夜，转移反应液至5升瓶；另外，称量160克醋酸钠，溶解于1600毫升的甲醇中，在酯化反应结束后滴加至反应液中，此时产生不溶的牛肠粘膜肝素苄基酯沉淀，再加入3升甲醇，搅拌5分钟，静置过夜，小心地吸去上清液，下层沉降区混合物，用100目滤布抽滤，得到牛肠粘膜肝素苄基酯粗品；粗品再两次以1.6升甲醇重悬，充分搅拌洗涤后抽滤；称取20克氯化钠并溶于160毫升水中，用该氯化钠水溶液溶解上述固体，再以1.6升的甲醇醇沉，沉淀物以离心机6000转/分钟离心5分钟收获；重复盐水溶再甲醇醇沉3次，沉淀转移至真空干燥箱，60℃真空干燥50小时，所得的牛肠粘膜肝素苄基酯称重60.2克，干燥失重为3.3％，酯化度折干后为12.8％；取上述牛肠粘膜肝素苄基酯50克，溶于1.25升水中，加热至60℃，保温60±1℃30分钟以上；另外准确称取6.25克50％氢氧化钠溶液，加入上述保温的水溶液中，继续搅拌保温60±2℃，反应90分钟，将反应液冷却至室温，加入25克30％双氧水，氧化脱色30分钟；用稀盐酸调pH至7.0，0.22微米过滤反应液，滤液加125克氯化钠，搅拌确保氯化钠全溶，调pH至6.0，再0.22微米精过滤；加入3升甲醇醇沉，沉淀物经400目过滤；沉淀物再以3升甲醇重悬搅拌30分钟，抽滤取沉淀；沉淀溶于120克水后，转移至冻干瓶，真空冻干30小时；冻干粉称重后装袋，密封送检。