[发明专利]一种HPV‑16与宿主遗传因素的联合效应的测试方法

摘要

本发明公开了一种HPV‑16与宿主遗传因素的联合效应的测试方法，综合HPV和宿主双方因素，能够有效提高对宫颈癌发病的预警能力，有利于开展符合成本‑效益的宫颈癌筛查，为宫颈癌预防关口前移，从而采取合理诊治提供了可靠的生物标志物和检测手段。本发明首次发现HPV‑16与宿主遗传因素的联合效应显著增加了宫颈癌的发病风险，与携带rs3077 GG基因型的其他高危型HPV感染者相比，携带GA/AA基因型且感染HPV‑16的女性发生宫颈癌的风险增加了3.11倍；与携带rs3775291 GG基因型的其他高危型HPV感染者相比，携带GA/AA基因型且感染HPV‑16的女性发生宫颈癌的风险增加了2.64倍。

主权项

一种HPV‑16与宿主遗传因素的联合效应的测试方法，其特征在于，所述HPV‑16与宿主遗传因素的联合效应的测试方法包括以下步骤：步骤一，收集子宫颈口内外的脱落细胞，将沾有细胞物的小刷子放入装有保存液的标本储存瓶里；采用DNA提取试剂盒提取宫颈脱落细胞中HPV病毒和人类基因组的总DNA，用于HPV的PCR检测和人类基因遗传变异位点的分型检测；步骤二，PCR反应体系为：总体积20μl，含有约50ng模板DNA,12.5pmol每种引物，0.1mM每种单核苷酸，10×PCR缓冲液，1.5mM MgCl2和1.0单位Taq酶；10×PCR缓冲液为50mM KCl，10mM Tris HCl和0.1％Triton X‑100；取5ul PCR产物与1ul溴酚蓝混匀后上样，于3％琼脂糖凝胶80V电泳40分钟，紫外凝胶成像分析系统观察条带位置可明确HPV型别；步骤三，选取的人类免疫相关通路的核心基因，包括了IL17A、IL23R、IL12R、TLR1、TLR3、TLR9,使用ABI 7900HT实时荧光定量PCR仪进行基因分型；步骤四，实时荧光定量PCR反应条件：50℃2min，95℃15s，60℃1min，循环次数为45次,扩增循环结束后，读取扩增后荧光信号，运用SDS2.0软件进行基因型判读。