[发明专利]一种人抗体基因重组质粒的转染方法有效
| 申请号： | 201610701207.0 | 申请日： | 2016-08-22 |
| 公开（公告）号： | CN106318971B | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 魏强;胡萍;辛洪波;刘苏俊;殷文曲 | 申请（专利权）人： | 南昌大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85 |
| 代理公司： | 36122 南昌市平凡知识产权代理事务所 | 代理人： | 夏材祥 |
| 地址： | 330031 江西省*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | 一种抗体基因重组质粒的转染方法，是采用脂质体转染方法，将Lipofectamine3000作为转染试剂，HEK293细胞作为转染的宿主细胞，边传代边转染，将人抗体重链基因重组质粒和人抗体轻链基因重组质粒体外瞬时共转染至HEK293细胞，培养48h后，检测细胞培养上清IgG分泌量，从而将人抗体基因重组质粒成功转染至HEK293细胞。本发明所述转染方法操作简便，安全，重复性好，可自然降解，低细胞毒性，快速，高效，经济，适应性广等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 转染 重组质粒 细胞培养 人抗体轻链基因 人抗体重链基因 传代 低细胞毒性 人抗体基因 脂质体转染 抗体基因 宿主细胞 转染试剂 自然降解 共转染 体外 分泌 检测 安全 成功 | ||
【主权项】：
1.一种人抗体基因重组质粒的转染方法，其特征在于，包括如下步骤：/n（1）人抗体基因重组质粒转染HEK293细胞，包括步骤：/n(a) HEK293细胞传代、接种：使用含10%FBS的高糖DMEM培养基培养HEK293细胞，待细胞密度达到80%左右，将0.25%的胰酶-EDTA消化终止后的细胞，按每孔10000个细胞接种96孔板，再补加培养液至190µL;/n同时设置不同的对照组，对照组1为只加单个重链的质粒组；对照组2为只加单个轻链的质粒组；对照组3只加转染试剂和细胞，不加质粒；对照组4只加细胞，不加转染试剂和质粒；/n(b)用opti-MEM分别稀释质粒和转染试剂，使得加入每孔的转染试剂Lipofectamine3000为0.15µL，每孔的P3000为0.2µL，每孔的人抗体重链基因重组质粒和人抗体轻链基因重组质粒各为50ng；/n(c) 按1：1的体积比例将稀释的质粒和稀释的转染试剂混匀，室温孵育5min后，将其加入到接种有细胞的孔中，在37℃及5%的CO
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