[发明专利]一种基于纳米NiCo2O4@AD双功能催化剂的电化学发光免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明公开一种基于纳米NiCo₂O₄@AD双功能催化剂的电化学发光免疫传感器的制备方法及应用，特点是通过将金刚烷修饰到NiCo₂O₄纳米片表面进而制得双功能催化剂NiCo₂O₄@AD，由于具有大比表面积及优异的电子传导能力的NiCo₂O₄纳米片与具有良好供电能力的金刚烷之间的协同效应，该复合材料修饰的电极显著提高了S₂O₈²⁻电化学发光体系的灵敏度及稳定性。基于NiCo₂O₄@AD良好的生物兼容性，将前列腺素E1抗体及前列腺素E1固定到修饰电极表面，制得前列腺素E1电化学发光免疫传感器，用于前列腺素E1的检测，检测范围0.1 fg/ml–1.0 ng/ml。具有特异性强、灵敏度高、稳定性好等优点。

主权项

1.一种基于金刚烷修饰的纳米NiCo2O4双功能催化剂的电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1） 玻碳电极首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；（2） 滴加3μL 浓度为 0.5 mg/mL的金刚烷修饰的纳米NiCo2O4悬浮液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温；（3） 滴加30 μL 浓度为 2.0 wt%的戊二醛溶液于步骤（2）制得的修饰电极表面活化1 h；（4） 滴加30 μL前列腺素E1抗体溶液于步骤（3）制得的修饰电极表面并在4°C冰箱中孵育40 min，用去离子水洗去物理吸附的前列腺素E1抗体；（5） 取40μL 浓度为1.0 wt.%的BSA 滴加到步骤（4）制得的修饰电极表面4°C冰箱中孵育1 h，以封闭电极表面上非特异性活性位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，并保存在4°C冰箱中；（6） 取30 μL浓度为0.1 fg/mL–1.0 ng/mL的前列腺素E1标准溶液滴于步骤（5）制得的修饰电极表面并在4°C冰箱中孵育40 min，用pH7.5的 PBS缓冲溶液冲洗电极表面，制得一种基于金刚烷修饰的纳米NiCo2O4双功能催化剂的前列腺素E1的电化学发光免疫传感器；所述的金刚烷修饰的纳米NiCo2O4悬浮液由下述方法制备的：1.0 mL 浓度为1.0 mg/mL 的纳米NiCo2O4与1.0 mL 浓度为1.0 wt%的3‑氨丙基三乙氧基硅烷混合振荡12h，离心收集氨基功能化的纳米NiCo2O4产物并重新分散在2.0 mL的去离子水中；然后将1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐及N‑羟基琥珀酰亚胺活化的1‑金刚烷甲酸与氨基功能化的纳米NiCo2O4产物混合振荡2h，制得金刚烷修饰的纳米NiCo2O4, 离心收集金刚烷修饰的纳米NiCo2O4产物并重新分散在2.0 mL的去离子水中。